FVTF 抑制肝癌干细胞特性的关键发现：为肝癌治疗带来新曙光

为探究 FVTF 抑制肝癌（HCC）细胞干性的机制，研究发现其靶向 DNMT1/miR-34a-5p/FoxM1 轴，或成治疗新希望。

　　肝癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）是全球范围内严重威胁人类健康的恶性肿瘤，它在癌症发病率排行榜上位居第五，而 5 年生存率却仅有 18%，是导致癌症相关死亡的第三大 “元凶”。尽管当前肝癌治疗手段不断发展，但治疗后癌症的复发和转移问题，使得患者的 5 年生存率依旧处于低位。这背后的 “罪魁祸首” 之一，便是肝癌中存在的少量癌症干细胞（Cancer Stem Like Cells，CSLCs）。这些干细胞如同隐藏在肿瘤中的 “种子”，不仅能促进肿瘤的发生、转移，还会让肿瘤对各种治疗手段产生抗性。因此，找到能够精准打击肝癌干细胞的药物，并揭开其作用机制，成为了肝癌治疗领域的关键课题。

中南大学湘雅医院等机构的研究人员勇挑重担，针对这一难题展开了深入研究。他们将目光聚焦于一种源自中药蔓荆子（Fructus Viticis）的新型候选制剂 —— 蔓荆子总黄酮（Fructus Viticis Total Flavonoids，FVTF）。此前研究虽已发现 FVTF 具有抗癌活性，但它抑制肝癌细胞干性的具体机制却始终是个谜。经过一系列严谨的实验，研究人员发现 FVTF 可以通过靶向 DNMT1/miR-34a-5p/FoxM1 轴，有效抑制肝癌细胞的干性。这一发现意义重大，为肝癌的治疗提供了新的潜在药物和治疗靶点，相关研究成果发表在《Chinese Medicine》上。

为了开展这项研究，研究人员采用了多种关键技术方法。他们运用超高效液相色谱 - 质谱联用仪（UPLC-MS/MS）对 FVTF 的成分进行分析鉴定；通过肿瘤球形成实验、软琼脂集落形成实验等体外实验，以及构建裸鼠异种移植模型进行体内实验，评估 FVTF 对肝癌细胞干性的影响；利用 PCR 阵列、定量实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）等技术筛选和验证相关基因和微小 RNA（miRNA）的表达变化；借助双荧光素酶报告基因实验、焦磷酸测序等方法探究分子间的调控机制；同时，使用肝癌组织芯片（TMA）进行免疫组化和原位杂交实验，分析相关分子在临床样本中的表达及意义。

在研究结果方面，首先是 FVTF 的成分鉴定。通过 UPLC-MS/MS 分析，研究人员从 FVTF 中成功鉴定出 26 种化合物，其中包括 10 种黄酮类化合物，且发现化合物 19（川陈皮素，Nobiletin）在 FVTF 中含量最为丰富。

接着是 FVTF 对肝癌细胞干性的抑制作用。体外实验中，研究人员用不同浓度的 FVTF 处理 MHCC97H 和 SK-Hep-1 肝癌细胞，结果显示 FVTF 能够以剂量依赖的方式降低肿瘤球和软琼脂集落的形成能力，同时减少 CD44 蛋白以及 BMI1、OCT4 和 SOX2 等 mRNA 的表达水平。在体内实验中，给接种了 MHCC97H 细胞的裸鼠灌胃 FVTF，发现 FVTF 可以显著抑制肿瘤的形成频率和生长速率，降低肿瘤起始能力。这一系列实验充分表明，FVTF 在体外和体内都能有效抑制肝癌细胞的干性。

然后是 FVTF 的作用机制探究。研究人员通过 PCR 阵列筛选出 FVTF 处理前后 MHCC97H 细胞中差异表达的癌症干细胞相关基因，发现 FoxM1 和 DNMT1 明显下调，同时通过 qRT-PCR 鉴定出 miR-34a-5p 显著上调，这表明它们可能是 FVTF 在肝癌细胞中的作用靶点。进一步研究发现，FVTF 可以剂量依赖性地下调 DNMT1 的 mRNA 和蛋白水平，且通过双荧光素酶报告基因实验证实 FoxM1 是 miR-34a-5p 的直接靶基因。此外，FVTF 还能降低 miR-34a-5p 启动子的甲基化频率，而过表达 DNMT1 则会恢复其甲基化水平，这说明 FVTF 通过下调 DNMT1 表达使 miR-34a-5p 启动子去甲基化，进而上调 miR-34a-5p 表达，最终降低 FoxM1 的表达，即 FVTF 通过靶向 DNMT1/miR-34a-5p/FoxM1 轴发挥作用。

最后是 DNMT1、miR-34a-5p 和 FoxM1 在肝癌组织中的表达相关性及临床意义。研究人员对包含 92 例肝癌组织和 88 例配对癌旁组织的肝癌组织芯片进行检测，发现肝癌组织中 DNMT1 和 FoxM1 的表达水平显著高于癌旁组织，而 miR-34a-5p 的表达则明显降低。进一步分析发现，DNMT1 与 miR-34a-5p 表达呈负相关，与 FoxM1 表达呈正相关，且高 DNMT1、低 miR-34a-5p 和高 FoxM1 水平与肝癌患者的癌症复发相关。生存分析和 Cox 回归分析表明，DNMT1、miR-34a-5p 和 FoxM1 的组合可作为肝癌患者无病生存期（DFS）和总生存期（OS）的独立预后指标。

综合研究结论和讨论部分，这项研究首次系统地揭示了 FVTF 抑制肝癌细胞干性的分子机制，即通过靶向 DNMT1/miR-34a-5p/FoxM1 轴发挥作用。同时，发现这一轴与肝癌的复发和预后密切相关，为肝癌的治疗提供了新的潜在药物 FVTF，以及新的预后预测标志物组合（DNMT1、miR-34a-5p 和 FoxM1）。这不仅为肝癌的基础研究提供了重要理论依据，也为未来开发更有效的肝癌治疗策略带来了新的希望，有望推动肝癌治疗领域的进一步发展，为广大肝癌患者带来福音。