此前,已有研究聚焦于亚致死细菌感染对狼蛛雄性求偶、雌性择偶和交配成功率的影响。像铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)这种自然存在的机会性细菌病原体,会影响狼蛛的发育以及雄性求偶展示的多个方面。例如,感染的雄性狼蛛在视觉信号特征(前腿毛簇)上会出现更高程度的不对称性,且前腿毛簇相对较小;其振动信号也会发生变化,幼年感染的雄性狼蛛的摩擦脉冲率、平均振幅和峰值振幅都显著低于对照组雄性。在一些研究中,通过视频回放搭配化学信号的实验发现,雌性对来自对照组雄性的化学信号更有接受度,但在与成年感染雄性的测试中,雌性却没有表现出明显偏好。这些复杂且不一致的研究结果,让感染与狼蛛繁殖行为之间的关系变得更加扑朔迷离。同时,以往研究还存在诸多未解答的问题,比如在现场试验中,雌性在感染和未感染雄性之间直接选择时会有怎样的结果?雄性感染状态是否会影响求偶活力?雄性能否识别雌性的感染状态并调整自身行为?为了深入探究这些问题,来自美国辛辛那提大学(University of Cincinnati)的 Olivia Bauer-Nilsen、Frank O’Toole 和 George W. Uetz 等研究人员开展了一系列研究,相关成果发表在《Behavioral Ecology and Sociobiology》杂志上。
研究人员采用了多种关键技术方法来开展此项研究。首先是实验感染技术,他们选取了铜绿假单胞菌 PA - 14 菌株,对性成熟后的狼蛛进行感染处理。具体操作是,在狼蛛蜕皮至性成熟两周后,将其随机分为感染组和对照组,感染组的狼蛛在经历 24 小时脱水诱导口渴后,给予含有 600 菌落形成单位(CFUs)病原体的 1 微升无菌水滴,对照组则给予无菌水。其次是交配试验技术,在感染处理约 24 小时后,将狼蛛随机分配到三联交配组,即一只感染或未感染的雌性与一只感染雄性和一只未感染雄性配对,在圆形塑料竞技场中进行交配试验,并全程录像。最后是行为评分技术,利用 Behavioral Observation Research Interactive Software(BORIS)软件,对交配结果和雄性的多种行为进行量化评分,包括求偶展示行为(如每分钟的弹跳 / 急促敲击次数、腿拱起次数)、攻击行为以及一些行为状态的持续时间(如主动化学感知时间、求偶潜伏期、求偶回合平均持续时间)等。