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为解决西奈山楂(Crataegus sinaica)种子萌发率低的问题,研究人员开展体外萌发研究,发现多种因素可促进萌发,意义重大。
西奈山楂,一种生长在中东地区,主要分布于埃及西奈半岛南部圣凯瑟琳山脉的珍稀野生树种,不仅有着潜在的药用价值,还在维护当地生态平衡方面发挥着重要作用。然而,它正面临着极高的灭绝风险。其种子在自然环境下的萌发率极低,这主要是由于外源性和内源性休眠,坚硬的石质内果皮以及未成熟的胚都在阻碍着种子发芽。与此同时,过度放牧、人类活动的干扰,比如被当作柴火使用,再加上气候变化的影响,都使得西奈山楂的生存状况岌岌可危。为了拯救这一濒危物种,来自埃及赫尔万大学植物学系的研究人员 Hebatallah Aly、Shrouk Mahmoud 和 Ahmed El?Bakry 开展了一项关于西奈山楂体外种子萌发的研究,相关成果发表在《Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC)》杂志上。
研究人员在本次研究中主要采用了以下关键技术方法:首先,从圣凯瑟琳保护区的不同地点采集完全成熟的果实获取种子,并进行严格的种子灭菌处理。之后,通过设置不同的处理组,研究各种因素对种子萌发的影响。利用特定的实验方法测定种子中的总可溶性糖、总碳水化合物、总蛋白以及内源激素脱落酸(ABA)和赤霉素(GA3)的浓度变化,以此来探究种子在成熟和萌发过程中的生理变化。
下面来详细看看研究结果:
- 冷层积温度和孵育时间的影响:研究人员设置了 7°C 和 -20°C 两个冷层积温度处理组,在不同时间收集种子进行体外萌发实验。结果发现,7°C 冷层积处理能显著提高种子萌发率(GP),处理 4 周时萌发率最高可达 29.3%,相比对照组(未层积种子),GP 提高了 64%。而 -20°C 的处理对种子萌发率影响不显著,并且超过 4 周的层积时间会使萌发率下降。
- 不同浓度细胞分裂素的影响:以 7°C 冷层积 4 周的种子为材料,研究 6 - 苄氨基腺嘌呤(BA)和间 - 玉米素(mTp)不同浓度组合对种子萌发的影响。结果显示,BA(0.5mg/L)和 mTp(0.5mg/L)组合的培养基上,种子萌发率最高,达到 36%。而且,低浓度的 BA 和 mTp 比高浓度更能有效提高 GP,相同浓度下 mTp 对 GP 的促进作用比 BA 更明显。
- 芥子酸(SA)浓度和培养基强度的影响:在 7°C 冷层积 4 周的种子实验中,研究不同浓度 SA 和不同强度培养基对种子萌发的影响。结果表明,全强度 MSB5 培养基添加 2mg/L SA 时,种子萌发率最高(75%)。全强度 MSB5 培养基的萌发率约为半强度培养基的两倍,低浓度(1 和 2mg/L)的 SA 可使层积种子的萌发率提高约 47%,但高浓度 SA 会抑制种子萌发。
- 不同生长调节剂在水中对种子萌发的影响:将 7°C 冷层积 4 周的种子置于添加不同生长调节剂的无菌水中培养。结果显示,不同生长调节剂处理显著影响种子萌发,其中添加 GA3(200mg/L)、SA(1mg/L)和 mTp(0.5mg/L)的处理组,种子萌发率最高,达到 46%,仅次于对照组(40%)。
- 种子成熟和萌发过程中的生理变化:研究人员从不同地点采集不同基因型的果实种子,测定种子成熟和萌发过程中初级代谢产物和激素的变化。结果发现,种子中的总可溶性糖(TSS)、总碳水化合物(TC)和总可溶性蛋白(TSP)含量随采集时间、地点和它们的相互作用而显著变化。TSS 在分层处理后含量最高,TC 在 8 月含量较高,TSP 在分层处理后含量最低。ABA 含量受采集时间和地点的交互影响,种子成熟过程中 ABA 积累增加,GA3含量减少,二者呈负相关。分层处理降低了 ABA 含量,增加了 GA3含量,提高了 GA3/ABA 比值。
综合研究结果和讨论,本次研究首次成功实现了西奈山楂的体外萌发。冷层积、细胞分裂素的种类和浓度、芥子酸等因素都对种子的高效萌发有重要作用。种子储备物质的调动以及 GA3和 ABA 水平的平衡是调节种子休眠和促进萌发的关键变量。研究还发现,用水代替营养培养基作为生长底物,为未来温室试验简化物种萌发和繁殖过程提供了可能,这一方法成本低且技术要求简单。该研究成果为西奈山楂的保护、可持续种植和生态恢复提供了有力的技术支持,不过,未来还需要进一步研究其他影响种子休眠打破和萌发成功的因素,以及探索在控制和田间条件下促进幼苗生长的策略。