利用宫颈甲基化标记物无创诊断外阴发育异常：开拓女性健康新视野

为解决外阴鳞状上皮内病变（VSIL）诊断难题，研究人员开展相关研究，发现 GynTect? 甲基化标记物可检测外阴肿瘤，但需调整 。

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在女性健康的领域中，外阴鳞状细胞癌（VSCC）这个原本较为罕见的癌症，近年来却如同悄悄潜伏的 “敌人”，其发病率逐渐上升，发病的中位年龄也不断降低。而外阴鳞状上皮内病变（VSIL）作为 VSCC 的 “前身”，可细分为低级别 SIL（VLSIL，曾用名外阴上皮内瘤变 I 级，即 VIN I）和高级别 SIL（VHSIL，曾用名 VIN II 和 III）。VSIL 与人类乳头瘤病毒（HPV）关系密切，其中 HSIL（VIN II 和 III）主要 “盯上” 35 - 50 岁的女性 ，尽管其发展为癌症的绝对风险相对较低，但为了防患于未然，通常还是会进行治疗。VLSIL（VIN I）虽然有较高的自发缓解率，是低风险的癌前病变，但也不能掉以轻心；与之不同的是，分化型 VIN（dVIN）与 HPV 无关，却和硬化性苔藓、扁平苔藓紧密相连，且具有较高的致癌潜能。

目前，对于 VSIL 的诊断筛查存在诸多限制，不仅无法准确判断疾病的发展趋势，还缺乏有效的生物标志物来预测个体患癌风险。而在宫颈癌和肛门疾病的研究中，DNA 甲基化检测展现出了巨大的潜力，能识别出具有高癌症风险的前体病变。于是，来自德国多家机构的研究人员，包括 Carl von Ossietzky Universit?t Oldenburg 的 Sabeth Becker、Lena Dübbel 等人，开展了一项极具意义的研究，相关成果发表在《BMC Medicine》上。

研究人员为了探究宫颈甲基化标记物用于外阴病变诊断的可行性，采用了多种关键技术方法。在样本采集方面，收集了 121 例福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本、237 例新鲜外阴细胞涂片和 7 例新鲜冷冻的外阴癌样本。样本均来自 Klinikum Oldenburg University Hospital 妇产科的患者，涵盖了不同 VSIL 分级、HPV 状态、是否患有硬化性苔藓和扁平苔藓等多种情况。检测甲基化标记物时，使用 GynTect? 试剂盒，对样本进行 DNA 分离、亚硫酸氢盐处理，再通过甲基化特异性聚合酶链反应（PCR）进行分析。同时，运用实时定量 PCR（qRT - PCR）检测 DNA 甲基转移酶（DNMTs）的表达。

研究结果如下：

1. GynTect? 在不同样本中的检测表现：在 FFPE 样本中，不同病变程度的样本呈现出不同的 GynTect? 阳性率。无发育异常但取自高级别外阴肿瘤手术时肿瘤微环境的样本，阳性率为 43.75%；VLSIL（VIN I）样本阳性率为 76.92%；VHSIL（VIN II）样本阳性率为 64.71% ；VHSIL（VIN III）样本阳性率为 64.71%；VSCC 样本阳性率为 80.49%。在新鲜外阴细胞涂片中，无发育异常样本的阳性率仅为 5.45%，VHSIL（VIN III）样本阳性率达 77.78%，VSCC 样本阳性率为 75.00%。这表明 GynTect? 在检测外阴发育异常方面有一定的潜力，但在不同样本中的表现存在差异。
2. GynTect? 结果与 DNMT 表达、HPV 状态的关联：通过 qRT - PCR 分析发现，DNMT1 仅在 VHSIL（VIN III）和 VSCC 样本中表达，且表达与 GynTect? 阳性结果有一定关联；DNMT3a 在所有发育异常等级的样本中均有表达，且在 VLSIL（VIN I）中表达变化倍数最高。同时，研究还发现 HPV 阳性样本比例随发育异常等级升高而降低，且 GynTect? 检测的甲基化标记物似乎独立于 HPV 感染。
3. GynTect? 在不同病变及相关疾病样本中的检测性能：在 FFPE 组织中，将所有外阴发育异常和 VSCC 都归类为 “诊断阳性” 时，GynTect? 试剂盒的敏感性为 94.44%，特异性为 40.0%；仅将高级别外阴发育异常归类为 “诊断阳性” 时，敏感性为 97.37%，特异性为 29.17%。在新鲜外阴涂片中，试剂盒的敏感性为 94.12%，特异性为 90.91%，表现出良好的检测性能。然而，对于硬化性苔藓和扁平苔藓样本，无论是否伴有 dVIN，试剂盒的阳性率都较高，可能会导致假阳性结果。
4. 宫颈发育异常对外阴甲基化的影响：研究还意外发现，患有宫颈发育异常的患者，其外阴涂片的 GynTect? 阳性比例明显高于无宫颈发育异常的患者，且随着宫颈发育异常等级的升高，外阴涂片阳性的患者数量增多。这提示 DNA 甲基化可能并非局限于局部，宫颈发育异常可能对远处的外阴组织产生影响。

综合研究结论和讨论部分，这项研究意义重大。一方面，证实了 GynTect? 诊断甲基化试剂盒在检测外阴肿瘤方面具有一定的适用性，尤其在新鲜外阴涂片检测中准确性更高。但同时也发现，为了达到更好的特异性，需要对试剂盒进行调整，例如优化阈值、调整标记物评分等，还需要进一步探索更多适合纳入诊断试剂盒的标记物。另一方面，研究发现 DNA 甲基化变化在 VLSIL（VIN I）阶段就已出现，且可能比之前认为的更广泛，宫颈发育异常似乎会影响外阴的甲基化状态。这为癌症表观遗传学研究提供了新的视角，也提示临床医生在诊断和监测女性生殖系统疾病时，应更加全面地考虑多部位的病变情况，对患有（疑似）外阴和宫颈发育异常的患者，应进一步检查其他生殖器发育异常情况，从而为患者提供更精准的诊疗方案。