攻克卵巢癌难题新突破：PI3Kα 抑制剂与顺铂联合治疗，为 PIK3CA 突变患者带来曙光

为解决卵巢癌腹膜转移及铂盐耐药问题，法国研究人员开展 PI3K/Akt 信号通路靶向治疗研究。结果显示，BYL-719 与顺铂联合对 PIK3CA 突变的 SKOV-3 细胞有协同杀伤作用。该研究为卵巢癌治疗提供新思路，值得一读。

　　

卵巢癌，这个隐匿在女性身体里的 “杀手”，一直以来都让医学界十分头疼。2022 年，全球有 324,398 例新诊断的卵巢癌病例，206,839 人因此失去生命。它之所以如此可怕，是因为很多患者确诊时就已经是晚期，癌细胞常常在腹腔内广泛种植转移，形成腹膜癌病（peritoneal carcinomatosis），而且还特别容易对铂盐类化疗药物产生耐药性 。

晚期卵巢癌患者中，大约 89% 会出现大量腹水（ascites），这些腹水就像是癌细胞的 “运输工具”，癌细胞会随着腹水在腹腔内四处 “漂流”，然后在腹膜和大网膜上 “安营扎寨”，形成多个转移病灶 。更麻烦的是，肿瘤细胞在多细胞三维（3D）结构中，对化疗的抵抗能力会大大增强，就好像穿上了一层坚固的 “铠甲”，让化疗药物难以发挥作用。而且，肿瘤微环境中的间充质干细胞（MSC）也会来 “捣乱”，它们不仅能帮助癌细胞形成更有侵袭性的肿瘤球（tumourospheres），还能通过释放脂肪酸等方式，让癌细胞对化疗药物产生耐药性。

虽然近年来，像聚（ADP - 核糖）聚合酶（PARP）抑制剂等靶向治疗药物的出现，给卵巢癌患者带来了新的希望，但目前针对卵巢癌腹膜转移的有效治疗手段仍然十分有限。在这样的背景下，法国的研究人员迫切地想要找到新的治疗方法，来攻克卵巢癌这个难题。他们的研究成果发表在《Scientific Reports》期刊上，论文题目是《Targeting the PI3K/Akt signalling pathway in ovarian cancer multicellular growth: a potential therapeutic approach》。研究发现，PI3Kα 特异性抑制剂 BYL - 719（Alpelisib）和顺铂（cisplatin）联合使用，可能是治疗携带 PIK3CA 基因突变的卵巢癌患者的有效方案，这为卵巢癌的治疗开辟了新的方向。

为了开展这项研究，研究人员主要用到了以下几种关键技术方法：首先是细胞培养技术，他们培养了多种卵巢癌细胞系，像 SKOV - 3、EFO - 21 和 OVCAR - 3 等，还培养了间充质干细胞；其次是蛋白质免疫印迹法（Western blot），用来检测细胞中蛋白质的表达和磷酸化水平；另外，通过二维（2D）和三维（3D）细胞毒性实验，研究药物对癌细胞的杀伤作用；最后，利用活死细胞染色（Live and dead assay）和共聚焦显微镜观察，直观地了解药物处理后癌细胞的存活情况 。

下面来看看具体的研究结果：

• PI3K 抑制剂降低卵巢癌细胞系中 PI3K/Akt 活性，与 PIK3CA 突变状态无关：研究人员挑选了 3 种来自不同腹水样本、具有不同组织学类型和突变特征的卵巢癌细胞系。其中，EFO - 21 和 OVCAR - 3 是 PIK3CA 野生型，分别来自透明细胞癌和高级别浆液性癌患者；SKOV - 3 则携带 PIK3CA 致癌突变 H1047R，来自非浆液性癌患者。用 PI3Kα 特异性抑制剂 BYL - 719 处理这些细胞 2 小时后发现，无论 PIK3CA 基因是否突变，BYL - 719 都能显著抑制 Akt 蛋白在丝氨酸 473 位点的磷酸化，这表明靶向 PI3Kα 有望降低所有卵巢癌细胞系中 PI3K/Akt 的活性 。
• PI3Kα 特异性抑制剂 BYL - 719 与顺铂协同减少卵巢癌细胞数量：在二维培养条件下，研究人员用 BYL - 719 和顺铂联合处理细胞 7 天。结果发现，高浓度的 BYL - 719（1 和 10 μM）能显著减少存活的癌细胞数量，顺铂的杀伤作用则呈现浓度依赖性。在不同细胞系中，两种药物的协同作用有所不同。在 SKOV - 3 细胞中，低浓度 BYL - 719（0.01 μM）和高浓度顺铂（50 μM）协同作用明显；在 EFO - 21 细胞中，高浓度 BYL - 719（10 μM）与高（50 μM）或低（0.5 μM）浓度顺铂联合使用时表现出协同效应。然而，在三维培养的细胞聚集体中，所有细胞系对 BYL - 719 的敏感性都降低了，SKOV - 3 细胞甚至对顺铂完全耐药。不过，在三维聚集体中，BYL - 719 和顺铂在 SKOV - 3 细胞中仍具有协同作用，而在 EFO - 21 和 OVCAR - 3 细胞中则没有 。
• PI3Kα 特异性抑制剂 BYL - 719 增强顺铂对三维培养细胞的细胞毒性作用：为了进一步确认 BYL - 719 和顺铂在 SKOV - 3 细胞中的协同作用，研究人员进行了活死细胞染色实验。结果显示，1 μM 的 BYL - 719 会使三维结构核心的癌细胞部分死亡，5 μM 的顺铂会破坏三维结构，而两者联合使用则能完全消除 SKOV - 3 细胞聚集体，效果比单独使用任何一种药物都要好。而且，用 PI3Kβ 特异性抑制剂 TGX - 221 或 PI3Kβ/δ 特异性抑制剂 AZD8186 处理 SKOV - 3 细胞时，并不会影响细胞的结构、活力以及对顺铂的敏感性，这表明这种协同作用是 PI3Kα 特异性抑制剂特有的 。
• PI3Kα 特异性抑制剂 BYL - 719 联合顺铂在间充质干细胞压实的细胞聚集体中仍然有效：在腹水中，卵巢癌细胞常常与周围的微环境细胞相互作用。研究人员将 SKOV - 3 细胞与间充质干细胞共培养，发现间充质干细胞会使 SKOV - 3 细胞聚集体更加紧实。用 1 μM 的 BYL - 719、5 μM 的顺铂或两者联合处理这些共培养的细胞聚集体后发现，联合用药在间充质干细胞存在的情况下，仍然能对 SKOV - 3 细胞聚集体产生很强的细胞毒性，效果比单独使用顺铂要好得多 。

综合研究结果和讨论部分，这项研究意义重大。卵巢癌腹膜转移和化疗耐药是目前卵巢癌治疗面临的两大难题，而该研究发现 PI3Kα 特异性抑制剂 BYL - 719 在多种卵巢癌细胞系中都能有效抑制 PI3K/Akt 信号通路的活性，为卵巢癌的治疗提供了新的潜在靶点。虽然在三维培养条件下，只有携带 PIK3CA 基因突变的 SKOV - 3 细胞对 BYL - 719 和顺铂的联合治疗敏感，但这也为精准治疗指明了方向。研究还证实，即使存在间充质干细胞，联合治疗依然有效，这说明这种治疗方案在实际的肿瘤微环境中具有应用潜力。之前的研究也表明，针对不同基因突变的患者，联合使用不同的靶向药物能取得更好的治疗效果 。因此，研究人员建议在临床上对初治的 PIK3CA 基因突变的卵巢癌患者，尝试使用 BYL - 719 联合顺铂进行治疗，这有望改善这类患者的治疗效果，延长患者的生存期，为卵巢癌患者带来新的希望 。