反义核酸是基因治疗药物的一个新的领域。应用碱基互补原理,利用一段与疾病基因互补的DNA
或RNA 封闭疾病的基因表达,从而达到治疗疾病的目的。 反义核酸的生产是利用化学的方法人工合成的。在固相的配基上按照所需的序列逐一加上相应碱基。由于使用化学合成的方法,成本较高。新一代Primer
Support 200是聚苯乙烯/二乙烯基苯的交连的多孔微球,粒径30 mm,载量高达200 mmol/g。有以下特点:
1. 低的试剂消耗。是传统的多孔玻璃试剂消耗的80-
90%。尤其在大规模生产中,单位成本会更低。
2. 高产量,一般> 125OD/mmol。高于传统的多孔玻璃 产量25%。
3. 高纯度,一般> 75% 全长。合成失败片段少, < 4%
(n-1)。纯化更简单。
4. 有完整的生产认证资料,确保产品安全。
5. 配合AKTAoligo及oligoProcess 仪器。
6. 19 世纪80 年代,聚苯乙烯/二乙烯基苯的交连的多 孔微球用于药物生产。
7. Amersham Biosciences公司的Primer Support的生产批量大,确保Primer
Support 的一致性。
8. 储存为固体,在合成的试剂条件下粒径不变。 下表为 Primer Support 200 的特性:
Primer
Support 基质 |
聚苯乙烯/二乙烯基苯 |
粒径 |
30
µm |
粒形 |
均一的多孔微球 |
分布 |
5%
cv 合成试剂 |
核酸密度 |
200
± 10 µmol/g |
贮存环境 |
4-30℃ |
要求合成柱高 |
10
厘米 |
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下图为利用Primer Support 200生产的不同规模的纯度测定。
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图1.合成20-mer反义核酸,204 µmol的产量,纯度79.5%。
图2. 合成20-mer反义核酸,4mmol的产量,纯度79.3%。
30-90碱基长的反义核酸的序列在分析及诊断上利用广泛,但是用一般的Primer Support 或多孔玻璃合成效率较低。
Primer Support 200的低密度的核酸配基可以合成长链的反义核酸。为了方便,Amersham
Biosciences 公司利用这种Primer Support 生产出一次性合成柱,使合成更加简便。
下表为俣成柱的特性:
Primer
Support 基质 |
聚苯乙烯/二乙烯基苯 |
粒径 |
30
µm |
粒形 |
均一的多孔微球 |
分布 |
5% cv
合成试剂 |
核酸密度SSS |
4
± 4 mmol/g |
贮存环境 |
4-30℃ |
耐压 |
10
bar |
合成柱合成规模 |
15 ±
3 µmol 30 ± 5 µmol
120 ± 20 µmol |
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