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| 图1. Apo-ONE物质Caspase-3/7检测方法的灵敏度。我们在RPMI 1640中将Jurkat细胞培养到5.0×105细胞/m1的密度。为了诱导细胞凋亡，我们用溶解在DMSO中的抗人Fas抗体100ng/ml，处理细胞，使用96孔板，培养在含5%
CO2的37℃培养箱中，达5小时。对照细胞只使用DMSO进行处理。在细胞凋亡完成之后，将均质Caspase-3/7试剂与细胞按1:1的体积进行混合，并用Cytofluor®Ⅱ荧光平板读数仪记录荧光，A图:
与均质Caspase-3/7试剂保温1小时后，测试625个细胞，我们可以在诱导和非诱导的细胞间检测出明显的差别（P≤0.02；学生t试验）。B图：将细胞与均质Caspase-3/7试剂的保温时间延长，可以提高测试的灵敏度，按上面描述的方法培养并处理Jurkat细胞，并使用625细胞/孔或1,250细胞/孔。同均质Caspase-3/7试剂保温的时间分别为1, 2, 3或18小时。 |
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| 图2. 用Z-DEVD-罗丹明110底物能获得更高的灵敏度。按图1所描述的培养Jurkat细胞，并用100ng/ml的人抗Fas抗体培养5小时，诱导细胞凋亡，然后加入均质Caspase-3/7缓冲液及50μM Z-DEVD-罗丹明110或50μM Ac-DEVD-AMC。在室温保温平板1小时，然后用Cytofluor®Ⅱ(r)荧光平板读数仪测定荧光(*，用学生t试验表明诱导和非诱导细胞存在明显差别, P<0.01。) | 图3. 用Apo-ONE™均质Caspase-3/7试剂筛选可诱导细胞凋亡物质。我们将Jurkat细胞在384孔板中，培养到5.0×103细胞/孔的密度，培养中加入侯选细胞凋亡化合物（如图所示）。抗Fas抗体处理的细胞作为正细胞凋亡对照。为了抑制细胞凋亡，我们用终浓度为20μM的Z-VAD-RMK处理细胞,然后向细胞中加入抗Fas抗体。将细胞凋亡试剂在37℃，5% CO2中保温5小时后，我们加入均质Caspase-3/7,并在不同时间点，在Fluoro Skan平板读数仪上测定荧光。 |
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我们观察到各种化合物在Jurkat细胞内诱导细胞凋亡的程度间存在较大差别。这种差别也在意料之中，因为不同细胞类型之间诱导细胞凋亡时会有差别，而接触药物时间的长短也会导致诱导细胞凋亡时，出现差别。 结论 |
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参考文献 |
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