蛋白磷酸酶活性的荧光检测
ProFluorTM丝/苏蛋白磷酸酶检测以多孔板格式测量纯化的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶活性，仅仅包括“加入，混和和读数”步骤----是高通量应用的理想选择。检测适用于蛋白磷酸酶1（PP1）、PP2A、PP2B和PP2C。检测开始时，先用试剂盒提供的磷酸化双酰胺若丹明110肽底物（S/T R110底物）和对照AMC底物做一个标准磷酸酶反应，其中对照AMC底物作为反应抑制剂对照；接着磷酸酶反应，加入一个含有蛋白酶试剂的终止缓冲液，它在终止蛋白酶反应的同时，从非磷酸化底物中特异性去除氨基酸，释放出高荧光强度的若丹明110。被磷酸化的底物因不能被蛋白酶试剂消化而不发荧光。因此，测量的荧光强度与磷酸酶活性具有直接相关性。这个检测在96-和384-孔板上都能产生完美的Z’值（>0.8），也很容易从其它化合物中区别已知的磷酸酶抑制物。
|
|
|
产品特点
- 可得到预期结果：在96-和384-孔板上Z’值大于0.8。结果与预计高度相符。
- 测试化合物干扰最小：底物使用微摩尔浓度。产生的若丹明110荧光信号远远强于测试化合物发出的荧光信号。
- 包括了对照肽：试剂盒包括了对照肽（AAF-AMC）来监控蛋白酶活性。减少假阳性。
- 需要简单仪器：基本的荧光强度读出。可使用标准读板荧光仪。不需要昂贵的时间分辨荧光或荧光偏振仪器。
- 均质：加样-混和-测量格式操作平板的步骤，比其它磷酸酶检测步骤少。
- 快速：与其它激酶检测所需要的多个步骤和长孵育时间相比，通量需要的时间最少。
- 非放射性：没有放射性废物丢弃和安全问题。
|
在线手册
请登陆网站www.promega.com/tbs/ 点击“Technical Bulletins & Manuals", 查询TB324
|
|
