MERCK 快讯第三期：

需要更新菌株？直接买感受态细胞？
请在Novagen和Stratagene完全手册中选择！

DNA Marker，RNA Marker，Protein Marker
Novagen的marker产品种类齐全，价格合理，使用方便

Novagen的菌株和感受态细胞(请参考Novagen 2001目录p48-51)

    （DE3）宿主菌是lDE3溶原菌，染色体上带有一拷贝由lacUV5启动子控制的T7 RNA聚合酶基因。这类菌株配合pET载体一起表达。pLysS是带有可以与pET共存的、编码T7溶菌酶（T7 RNA聚合酶的天然抑制物）的质粒。 pLysS 菌株在被诱导前T7 RNA聚合酶的基础表达被抑制，这样可以使表达会影响宿主细胞生长和活力的重组体在宿主中更稳定。带有pLacI质粒的宿主菌产生额外的抑制pETBlue和pTriEx载体基础表达的lac阻遏蛋白。

    AD494菌株是硫氧还蛋白还原酶(trxB)突变菌株，能够在胞浆内形成二硫键，可产生具有正确折叠的活性蛋白。TrxB突变可用卡那霉素选择，因此该菌株可用于带氨苄抗性标记bla的质粒。

    B834是BL21的亲本菌株。这种蛋白酶缺陷的宿主菌是甲硫氨酸营养缺陷型，可用35S-甲硫氨酸和硒代甲硫氨酸对目标蛋白进行高特异活性标记，尤适用于结晶学研究。

    BL21是应用最广的宿主菌来源，具有lon和ompT蛋白酶缺陷的优点。
BL21TrxB菌株在蛋白酶缺陷BL21基础上具有与AD494菌株相同的硫氧还蛋白还原酶突变(trxB)。由于trxB宿主有利于胞浆内二硫键形成，可增加正确折叠的蛋白组分。TrxB突变可用卡那霉素选择，该菌株用于带氨苄抗性标记bla的质粒。

  BLR是BL21的recA-衍生菌株，能够改善质粒单体产量，有助于稳定含有重复序列或其产物能够引起原DE3噬菌体丢失的目标质粒。

    HMS174菌株在K-12基础上具有recA突变。与BLR一样，这些菌株能够稳定其产物引起DE3原噬菌体丢失的某些目标基因。

    NovaBlue是一种适合用作初始克隆宿主菌的K-12菌株，具有高转化效率、蓝/白斑筛选能力（与相应的质粒配合使用）和促进质粒DNA高产的recA endA突变。由于存在F附加体编码的lacIq阻遏蛋白，NovaBlue的DE3溶原菌是一个非常有用的严紧型宿主菌。

    OrigamiTM 是K-12衍生菌，硫氧还蛋白还原酶突变(trxB)和谷胱甘肽还原酶(gor)基因均被突变，能够大大增强胞浆内二硫键的形成。研究表明即使总体表达水平相似，Origami（DE3）表达的活性蛋白比其它宿主菌高10倍以上。Origami宿主菌与氨苄抗性质粒相容，适用于pET-32载体，硫氧还蛋白标签能够进一步增强在胞浆内形成二硫键。TrxB和gor突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此建议该菌株可用于带氨苄抗性标记bla的pET质粒。

    OrigamiTMB宿主菌是来源于BL21的 lacZY突变株，带有与原始Origami菌株相同的TrxB/gor突变。Origami B菌株集BL21、TunerTM和Origami宿主菌的优点于一体。TrxB和gor突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株可用于带氨苄抗性标记bla的pET质粒。

    RosettaTM宿主菌是BL21衍生菌，能明显增强带有大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达。该菌株通过一个相容性氯霉素抗性质粒补充密码子AUA、AGG、AGA、CUA、CCC和GGA的tRNAs。这样Rosetta菌株实现了“万能”的翻译。而一般情况下，由于受大肠杆菌密码子使用频率的限制，真核蛋白表达常有困难。tRNA基因由它们的天然启动子驱动。在Rosetta（DE3）pLysS和Rosetta（DE3）pLacI中，稀有tRNA基因存在于分别带有T7溶菌酶和lac阻遏基因的同一质粒上。

    TunerTM菌株是BL21的lacZY缺失突变株，能够同时调整同一培养体系中所有细胞的蛋白表达水平。lac通透酶（lacY）突变使得IPTG均匀进入群体所有细胞，从而获得浓度依赖的、水平均一的诱导。通过改变IPTG浓度，表达可从极低水平调节到极强的、完全诱导的表达水平（通常与所使用的pET载体相关）。低水平表达可以增强难表达蛋白的溶解性和活性。Tuner（DE3）pLacI菌株可与pETBlue和pTriExTM载体的配合使用。

Novagen公司菌株产品完全信息表》


Statagene的菌株和感受态细胞(请参考Stratagene 2001目录P68-84)
XL10-Gold®超级感受态细胞
· 提高连接DNA转化效率20-30倍
· 适用于转化大质粒DNA
· 获得更大的文库
· 增加发现全长克隆的可能性
· 快速生长，可获得大菌落和更多DNA

改善大DNA的转化
  Stratagene的XL10-Gold®超级感受态细胞用于高效转化大的DNA分子。这些细胞具有The(高效转化)表型，增加了大的连接DNA分子的转化效率。另外，XL10-Gold菌株可用蓝/白斑筛选，可克隆甲基化DNA并获得高质量小提DNA。XL10-Gold超级感受态细胞是需要高转化效率的克隆实验所首选的宿主细胞。

使质粒文库有接近lambda文库的质量
  XL10-Gold超级感受态细胞适用于构建质粒文库。连接的质粒DNA转化效率通常比超螺旋质粒低，大质粒转化效率通常比小质粒低。这种不利于大重组子的转化效率的倾向影响了质粒文库的构建并减少了发现全长cDNA克隆的机率。XL10-Gold超级感受态细胞减少了大小偏倚性性，获得大的更复杂文库，接近l文库的质量和效率。Stratagene提供了用于定向克隆的三种质粒cDNA文库构建试剂盒，并提供性能极优的XL10-Gold超级感受态细胞。

克隆甲基化DNA不受限制
  XL10-Gold细胞可克隆甲基化DNA。真核基因组DNA可高度甲基化，是保护内部酶切位点在后加工过程中不被切割，在合成过程中cDNA通常甲基化。当DNA甲基化方式不同于细菌宿主模式时，它就会被大肠杆菌宿主的限制系统切割。XL10-Gold细胞缺乏所有已知的大肠杆菌K12的限制系统，减少了获得非代表性文库的可能。这些内源性细菌限制系统的缺乏增加了将真核DNA导入大肠杆菌的效率，并增加了用甲基化或半甲基化DNA构建的文库的容量大小和代表性。

Electro Ten-Blue™电穿孔感受态细胞
· 高电穿孔效率(Hee)表型
· 获得大质粒和DNA连接物的最高转化效率
· 优化的电穿孔细胞，用于要求最高的克隆
· 包括StrataCleanTM树脂，用于快速纯化DNA(不需要沉淀) 

大质粒和连接DNA的最大转化效率
  Electro Ten-Blue™电穿孔感受态细胞具有Hee表型，能在电穿孔时更好地存活, 从而增加了大质粒和连接DNA的克隆效率。这一特征使它成为获得cDNA、基因组和递减文库的理想宿主。由于Hee表型，Electro Ten-Blue™ 比其它产品在转化大质粒和连接DNA时，优势更为明显。因此，如果有要求极高的克隆应用请放心选用该菌株。

  产品中提供StrataClean™树脂，用于快速纯化DNA，而不需要沉淀步骤，因此更加节省时间和DNA。这些细胞是recA¯，减少了重组的危险。同时也是endA-，对制备高质量DNA很重要。用蓝/白斑筛选来选择含有插入片段的克隆。这些细胞无细菌限制性系统，增加了真核DNA导入大肠杆菌的效率，并增加了用甲基化或半甲基化DNA构建的文库的大小和代表性。F'附加体带有卡那霉素抗性表型，同时保留被单链噬菌体M13感染的能力。

SURE®感受态细胞
· 减少重排和缺失
· 增加含有反向重复序列的DNA或Z-DNA的稳定性
· 获得高质量小提DNA
· 蓝/白斑筛选

增加含有二级结构的DNA的稳定性
  在原核细胞中准确复制真核DNA常很困难。特别是真核基因可能含有易被大肠杆菌DNA修复系统重排或删除的反向重复序列或二级结构（如Z-DNA）。SURE®感受态细胞通过去除与这些DNA序列重排和删除有关的基因，从而有利于克隆含有这些不规则结构的DNA。UV修复系统（uvrC）和SOS修复系统(umuC)都参与DNA损伤的修复。去除这些基因使含有长反向重复序列的DNA稳定性增加10-20倍。而大肠杆菌蛋白（SbcC 和RecJ蛋白）参与特定类型的重组。将这些基因突变大大增加了Z-DNA结构的稳定性。

  recB和recJ共突变赋予SURE细胞重组缺陷表型，大大减少了同源重组(类似于recA基因突变)。这些细胞也是限制系统阴性mcrA，(mcrCB-hsdSMR-mrr)171，可克隆甲基化DNA。endA1基因突变，所以从这些细胞制备的小提质粒DNA质量也很高。 
产品系列中有电穿孔感受态（³1´1010转化物/mgDNA）和感受态级（³5´108转化物/mgDNA）以及高效衍生菌SUREâ2优级感受态细胞（³1´109转化物/mgDNA）

蛋白表达
BL21-CodonPlus™感受态细胞
· 优化用于高水平表达异源蛋白
· 不需附加程序就可表达编码稀有密码的重组基因
· 含有编码大肠杆菌稀有tRNA密码子的额外基因拷贝

  BL21-CodonPlu™感受态细胞有助于解决密码子偏倚性问题，细胞中带有大肠杆菌稀有tRNA的额外基因拷贝，从而可以高水平表达许多在常规大肠杆菌宿主中难以表达或不能表达的蛋白。BL21-CodonPlus™–RIL细胞带有额外拷贝的argU、ileY和leuW tRNA基因，解决了表达富含AT的基因组蛋白密码子偏倚性问题。而从富含GC的基因组表达蛋白，可选用BL21-CodonPlus™–RP细胞，它们具有额外拷贝的argU和proL基因。

Stratagene公司菌株产品一览

Marker(请参考Novagen 2001目录p206-211)
    Novagen的分子量标准产品种类齐全，包括DNA，RNA和蛋白质分析专用的各种分子量跨度的marker。由于是工程化制备，Novagen的marker具有片段大小间隔均匀易记，条带浓度一致的特点，因此能很方便地判断目标分子的大小和大致浓度和照相备案。

PCR分子量标准
  PCR分子量标准是从50-2000bp 的8个DNA片段混合物，溶在凝胶上样缓冲液中，含有两种不干扰紫外照射溴化乙啶染色条带的示踪染料。提供单独一管6X上样缓冲液。每管分子量标准足够用于50道溴化乙啶染色的TBE或TAE琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶。推荐上样量（5ml），产生均匀强度的明亮清晰条带，易于照相。

Perfect MassTMDNA梯
  除了可快速确定片段大小，定量分子量标准也便于大致估计DNA质量。每个标准上样中已知条带浓度是10ng、25ng、50ng和100ng。每个浓度有三个条带，总共为十二条带。分子量标准大小从150bp到10000bp。还包括单独一管6X上样缓冲液。

Perfect RNATM分子量标准
  Perfect RNA分子量标准模板混合物（0.1-1kb）可用于制备标记分子量标准。混合物中含有经过优化的七个线性质粒模板，可直接用T7 RNA聚合酶的转录。在合适的核苷酸标记条件下，一个反应体系可合成一套标记的Perfect RNA分子量标准。

Perfect ProteinTM分子量标准
  Perfect ProteinTM分子量标准专用于SDS-PAGE凝胶电泳的重组蛋白，可高度准确地确定未知样品大小。与许多常规分子量标准（如卵白蛋白，牛血清白蛋白等）不同，Perfect Protein分子量标准不含引起不规则迁移、异质性模糊条带或大小估计不准的寡糖。Perfect Protein分子量标准每个条带的质量已知，可用于估计样品蛋白的浓度。该分子量标准适合于考马斯亮蓝染色或其它凝胶染色方法（如银染，荧光染料等）。

  Perfect Protein分子量标准中每个蛋白都带有S.TagTM多肽，因此可用作任何Western杂交的高度准确内参，只要在二抗或链亲和素孵育过程中加入S-蛋白AP结合物或S-蛋白HRP结合物即可，操作极为简便。对于Western杂交，我们推荐使用Perfect Protein Western分子量标准，它以直接点样的浓度提供，可在标准杂交过程中最优化地转移最小和最大条带。

Perfect ProteinTM Western杂交试剂盒
  Perfect ProteinTM Western杂交试剂盒的特点是在任何Western杂交实验中使用AP或HRP方便地看到Perfect Protein分子量标准。只要将S-蛋白AP或S-蛋白HRP结合物（如二抗或链亲和素AP结合物）加到样品检测的同一孵育体系中即可检测到分子量标准。S-蛋白结合物特异性结合到蛋白分子量标准的S.TagTM多肽上（Kd=10-9），且不干扰目标分子检测。该系统可用于生色和化学发光AP或HRP底物。这种分子量标准检测方法克服了使用化学修饰方法的局限性，后者可导致不规则迁移和大小定量不准。此外，该分子量标准无糖基化，大小易记并具有较宽的分子量范围。试剂盒中Perfect Protein Western分子量标准以工作稀释度的上样缓冲液形式提供。蛋白大小是15，25，35，50，75，100和150 kDa。

Trail MixTM蛋白分子量标准
  Trail MixTM蛋白分子量标准是补充了一组三个预染指示蛋白的Novagen Perfect Protein分子量标准，可在电泳过程中直接看到蛋白迁移。与其它整个梯预染的分子量标准不同，Trail Mix只用三个参考条带（100、16和15kDa）确认蛋白迁移、分离和指示凝胶方向。预染经常导致条带加宽或影响迁移，并降低迁移率和分子量确定的精确性。Perfect Protein分子量标准的泳动或条带清晰程度不受Trail Mix预染条带的影响。

Trail MixTM Western杂交试剂盒
  Trail MixTM Western杂交试剂盒是Trail Mix蛋白分子量标准系列中的一个新产品，含有三个与常规Trail Mix蛋白分子量标准浓度相同的预染指示蛋白，试剂盒含有Trail Mix Western分子量标准以及S-蛋白AP或HRP结合物，用于混合物中Perfect Protein分子量标准（均是S.TagTM融合蛋白）的Western杂交检测。结合物可与抗体或链亲和素一起加入，同时检测相邻泳道的目标蛋白。
Novagen公司Marker类产品信息表>