1. 表达水平的控制
对于一些未知和有毒性的蛋白的分析需要有严谨的启动子控制。T7启动子提供了非常严谨的控制，T7 lac 提供了最低的基础表达。那些带有pLysS或pLysE基因型的宿主菌是提供最严谨控制的重要的工具。
宿主菌的选择和启动子控制的相关信息你都可以参考Novagen pET 系统操作手册。

2.增加可溶性和折叠
通过与信号序列或是催化二硫键形成的周质蛋白(如DsbA.Tag 或是DsbC.Tag序列)相融合，可以提高目的蛋白的可溶性或形成二硫键。我们也推荐你用胞质Trx.Tag序列融合并在trxB-突变株中表达。更多有关信息可以参照Novagen pET 系统操作手册。

3.如何选择融合标签
融合标签的选择取决于下游操作的计划。由于检测和纯化往往是联系在一起，选择合适的标签对于这两个步骤都相当的重要。Novagen提供的载体上有检测、纯化及其他用途的一系列融合标签。Novagen 有不同的操作方式让你去除融合标签而获得天然活性蛋白。

4.增强目的蛋白的可溶性
BL21trxB(DE3)和AD494菌株是硫氧还蛋白还原酶 (trxB)突变体，可以促进形成二硫键。这些菌株都是卡那抗性的，所以一般选用氨苄抗性的载体(如pET-32系列)。

5.C端与N端融合
确保得到纯化全长蛋白。

6.不依赖连接反应的克隆方法(LIC)
LIC是一个快速、定向克隆方法，用以在纯化后完全去处氨基端标签。pET LIC载体以线性形式提供。