NEWSLETTER For Life Science

秉承可靠品质,服务生命科学
 
2003年第5期
Novagen His标签单克隆抗体特别说明:

由于组氨酸链的抗原性并不是很好,常见的抗His抗体也并非是 “真正的”抗His抗体。也就是说,这些产品通常是识别多聚组氨酸以及一些其它序列,例如一个羧基末端(-COOH)或蛋白酶酶切位点等。这也就是说,如果表达蛋白的His标签的邻近序列“不对”的话,这样的目的蛋白就不能被上述抗His抗体检测到。这样一来,目的基因就必须克隆到特别的序列环境才能方便下步操作。

Novagen的His•Tag单克隆抗体是目前市场上独有的专门识别组氨酸残基的抗体。His•Tag® 单克隆抗体能有效检测连续5个以上组氨酸残基链,而与His附近的序列完全不相关。因此,Novagen的His•Tag® 单克隆抗体可以用来检测 任何C-端,N-端或内部带有组氨酸标签的目的蛋白。

Novagen提供的3ug的试用装经济方便,是小量检测的最佳选择。

参考资料:His•Tag单克隆抗体操作手册 (TB283)
                inNovations 11, p. 12

His•Tag® 单克隆抗体实验举例

检测内部、N-端及C-端His•Tag序列

37ºC培养各种pET重组子,以IPTG诱导,离心收集。以SDS样品缓冲液重悬细胞,以相同上样量跑SDS-聚丙烯酰胺胶,电泳后转硝酸纤维素膜。印迹膜用1:1000稀释His•Tag单克隆抗体孵育,随后用羊抗小鼠AP Conjugate和NBT/BCIP底物进行显色反应。载体上His•Tag邻近序列如上表所示。2-6道的所检测的目的蛋白为His•Tag β-半乳糖苷酶融合蛋白。

 
泳道 载体 I, N or C 邻近序列

1    Perfect Protein™ Western Markers

2    pET-15b         N       MGSSHHHHHHSSGLVPRGS…

3    pET-16b         N       MGHHHHHHHHHHSSGHIEGR…

4    pET-19b         N       MGHHHHHHHHHHSSGHIDDDDK…

5    pET-28b(+)     N       MGSSHHHHHHSSGLVPRGS…

6    pET-30b(+)     N       MHHHHHHSSGLVPRGS…

7    pET-31b(+)     C       HACQMLLEHHHHHH

8    pET-32a(+)     I        GSGSGHHHHHHSSGLVPRGS…

9    negative control extract

I = 内部His•Tag序列

N = N-端His•Tag序列

C = C-端His•Tag序列

首 页    上一页    下一页