0.1 M的NaOH虽然能有效地进行在位清洗,但却会损伤蛋白A。当在室温时蛋白A与0.1 M 的NaOH接触达到41 小时时,蛋白A 的载量会下降54%。在0.1 M 的NaOH 清洗液中添加乙醇能有效地保护蛋白A。在位消毒剂需要能有效地使细菌和病毒失活而又能保护蛋白A的活性。新的消毒剂应该能在与凝胶接触41小时后蛋白A的活性任然大于90%,而且能在30 分钟内使细菌和病毒减少大于5 logs。
保存缓冲液没有更换,因为在临床生产中没有发现有革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、霉菌或酵母的生长。
最后,PDL发现通过ProteinA 循环生产证实,Mabselect 能经济有效地每批生产20 kg 人源化抗体。
四、成功案例[4]
位于德国匹兹堡的罗氏公司将一种用于肿瘤治疗的单克隆抗体用于临床。他们已经明确知道现有的高容量的蛋 |
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白A介质可以用来纯化这种单克隆抗体,在将目前商用的几种蛋白A介质进行充分的比较之后, 由于MabSelect的高容量、高稳定性,以及易于被填充和清洗等特性而最终被罗氏公司选择应用。目的蛋白是通过无血清培养的转染的杂交B淋巴细胞表达的IgG1。将过滤后的无细胞上清上样到一根MabSelect 填充的FineLINE 柱子,柱床的高度为20 厘米,上样的浓度是30 mg/ml,流速大约是100 cm/h (流速只受所用系统的制约)。经过清洗和洗脱后,洗脱液立即用磷酸钾中和,将pH值调节到6.8到7.0。再用凝胶过滤检测,结果表明比活超过90%,纯度在95% 以上。
参考文献
1. Amersham Biosciences, Affinity Chromatography
Datafile of
Mabselect.
2. Amersham Biosciences, Downstream 36, p12-14.
3. Amersham Biosciences, Gab2002.
4. Amersham Biosciences, Downstream 33, p6-8.
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