图4. 将蛋白编码区克隆进入Flexi® 载体。
用PCR 引物将Sgf I及Pme I酶切位点添加到蛋白编码区。扩增后,纯化PCR产物以除去DNA聚合酶及引物,然后用Sgf I及Pme I消化。再次纯化DNA以除去由限制性内切酶释放的短的寡聚核苷酸。将消化的PCR 产物连接到同样经过Sgf I及Pme I消化的Flexi® 载体内。接着进行转化,使用受体Flexi® 载体的抗生素筛选细胞。
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![](images/Pma14.3.gif) |
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图5. 将蛋白编码区在Flexi?载体之间转移。
将含有蛋白编码区的供体Flexi® 载体与具有不同抗生素抗性的受体Flexi® 载体混合。用Flexi?酶混合物 (Sgf I及Pme I)消化这两个质粒并将混合物连接,然后转化进 E. coli。将细胞铺板于适合受体 Flexi® 载体的选择性培养基上。
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