干扰效应的稳定筛选
　　稳定细胞系的筛选使得研究人员可以在不涉及复杂的细胞转染影响的前提下，研究基因表达的抑制效果。为了产生稳定的细胞株，我们用克隆有p53靶序列或非特异对照序列的pGeneClip™ - 嘌呤霉素质粒转染293T细胞。在进行细胞转染及药物抗性筛选后，可选取一系列的克隆细胞株用于p53表达的筛选(图5B)。包含表达对照序列的载体的克隆，其p53的水平没有明显的减少。与此同时，六种表达p53 shRNA的克隆中的五个在p53的表达方面则显示有95%以上的减少。培养表达减少的p53克隆中的两种和对照中的一种，至11代，并进行了再次测定。对p53的抑制水平并没有发生变化(图5C)。这些实验数据显示 GeneClip™ 系统提供了一种有用的工具，可以在稳定的模式下，减少或消除特定蛋白的表达。

结论
　　GeneClip™ U1 Hairpin Cloning System能够快速克隆并方便筛选表达shRNA的靶DNA序列。载体以线性化

参考文献
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