5分钟内在FastDigest绿色缓冲液中完成单重、双重和三重酶切
5分钟质粒DNA酶切比较:
- 泳道 M:Thermo Scientific GeneRuler Express 分子量标准(货号: SM1553)
- 泳道1:对照,未酶切的质粒 DNA
- 泳道2:FastDigest EcoRI
- 泳道3:FastDigest EcoRI和FastDigest KpnI
- 泳道4:FastDigest EcoRI、FastDigest KpnI和FastDigest SmaI
赛默飞FastDigest限制性核酸内切酶是一套用于快速酶切的高级内切酶,是一种由176种限制性内切酶组成的高级酶切系统,统一缓冲液可实现100%的酶活性。具有如下优势:
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FastDigest系列内切酶是目前业内最丰富的限制性核酸内切酶产品系列之一。在酶学领域数十年的专业积累、丰富的同裂酶选择、顶级生产设施带来的高纯度酶生产能力,共同助力打造出首款使用统一缓冲液体系的限制性内切酶系统。
FastDigest 限制性内切酶 | 传统限制性内切酶 | |
---|---|---|
缓冲液体系 | 一种统一缓冲液 | 多达20种缓冲液 |
双重/多重限制性酶切 | 无拘无束——所有176种酶均使用一种统一缓冲液,且在其中均具有100%活性 | 受缓冲液兼容性限制 |
反应时间 | 5-15分钟 | 1小时至过夜 |
酶切后可直接上样进行凝胶电泳 | 是 | 否 |
下游实验应用 | 100%兼容缓冲液 | 部分兼容 |
星号活性 | 否 | 是 |
活性定义 | 在 FastDigest 缓冲液中,1 μL FastDigest 酶可在5至15分钟内切割 1 μg 底物 DNA | 在酶的最佳缓冲液中,1单位酶可在60分钟内水解 1 μg λDNA |
FastDigest绿色缓冲液及FastDigest无色缓冲液是我们独有的酶切缓冲液,对所有FastDigest限制性内切酶都具有100%活性。该缓冲体系可使用任意限制酶组合实现双重和多重酶切。无需连续酶切或更换缓冲液。
5分钟质粒DNA酶切比较:
DNA/RNA修饰酶,如连接酶、磷酸酶、激酶和嗜温DNA聚合酶在FastDigest无色和FastDigest绿色缓冲液中具有100%活性。因此,在下游应用中使用的酶可以直接加到FastDigest反应混合物中。不需要缓冲液更换或纯化步骤。
DNA/RNA 修饰酶 | 货号 | 在FastDigest绿色缓冲液/FastDigest缓冲液中的活性 |
---|---|---|
DNA 聚合酶 I,大肠杆菌 | EP0041 EP0042 | 100% |
Klenow 片段 | EP0051 EP0052 | 100% |
Klenow 片段 (exo-) | EP0421 EP0422 | 100% |
T4 DNA 聚合酶 | EP0061 EP0062 | 100% |
T7 DNA 聚合酶 | EP0081 | 100% |
T4 DNA 连接酶* | EL0011 EL0012 | 75–100% |
FastAP 热敏碱性磷酸酶 | EF0651 EF0652 EF0654 | 100% |
T4 多聚核苷酸激酶 | EK0031 EK0032 | 100% |
* T4 DNA连接酶活性需要0.5 mM ATP。
使用统一缓冲液在5-15分钟内完成双重和多重酶切:
常规限制性内切酶 连续酶切 | FastDigest 限制性内切酶 一种反应混合物 | ||
---|---|---|---|
Apal的反应体系构建 | 约2分钟 | FastDigest ApaI和XhoI的反应体系构建 | 约2分钟 |
孵育 | 60分钟 | 孵育 | 5分钟 |
Xhol的反应体系构建 | 约2分钟 | — | — |
孵育 | 60分钟 | — | — |
总时间 | >2小时 | 总时间 | 7分钟 |
基于方便性考虑,我们开发了FastDigest绿色缓冲液,其与FastDigest无色缓冲液具有同样的性能,但可将酶切反应混合物直接上样进行凝胶电泳。10X FastDigest绿色缓冲液包含密度试剂和两种示踪染料,从而可以实现直接上样电泳。蓝色染料在1%琼脂糖凝胶中的迁移率与3-5 kb DNA片段接近,并在424 nm时出现激发峰;而黄色染料在1%琼脂糖凝胶中的迁移速度稍快于10 bp DNA片段,并在615nm时出现激发峰。
含有FastDigest绿色缓冲液的反应混合物:
FastDigest限制性内切酶与FastDigest(无色或绿色)缓冲液结合使用,可消除星号活性:
使用常规限制性内切酶,当在较长的反应时间、高酶浓度和高甘油浓度、高 pH 值或低离子强度情况下,可能表现出星号或“松弛”活性。FastDigest限制性内切酶很好的解决了所有这些问题,可在5分钟内实现单重、双重甚至三重酶切,无任何星号活性出现。
5分钟质粒DNA酶切比较:
仅供科研使用,不可用于诊断目的。