冠状病毒载体构建 | 冠状病毒S蛋白假病毒包装 | 冠状病毒动物模型

COVID-19冠状病毒自身无疑是其相关研究的关键试剂，但是获得可观的病毒剂量并非易事。面这对些问题，最佳解决方式是采用反向遗传学的方法，即利用该病毒的人工重组载体来重构病毒本身。具体方法是，构建携带目的冠状病毒基因组的DNA载体，然后将其转染到包装细胞中来产生大量活病毒。该方法的优势在于，可以便捷地进行研究所需要的载体修饰，如添加报告基因（如EGFP）或引入特定的突变。此外，鉴于野生型冠状病毒的基因组为正义单链RNA，而该种方式制备重组冠状病毒的病毒基因组模板为DNA，载体本身并不具有传染性。冠状病毒载体可以安全地使用并以最低程度的生物安全规范进行运输。

我们提供的的冠状病毒载体系统适用于生产重组活病毒。用户只需将我们的载体转染到合适的包装细胞中，即可重构任何种类的活性冠状病毒。用户得到的病毒可以在适当的细胞系中进一步扩增以达到研究所需要的剂量。

我应该如何获取冠状病毒载体？

赛业生物科技与云舟生物科技合作，为您的冠状病毒研究提供冠状病毒载体构建服务。您可以在以下链接咨询我们的冠状病毒载体构建服务：点击此处发送载体设计咨询。

关于冠状病毒的更多细节信息如下表所示：

病毒代号	病毒全名	GenBank信息	所属家族	宿主	宿主受体	引发疾病	刺突蛋白（S蛋白）序列
HCoV-229E	Human coronavirus 229E	NC_002645.1	Alphacoronavirus	Human (Homo sapiens)	ANPEP; Cell entry aided by TMPRSS2	Common cold	View Sequence
HCoV-NL63	Human Coronavirus NL63	NC_005831.2	Alphacoronavirus	Human (Homo sapiens)	ACE2; Cell entry aided by TMPRSS2	Common cold	View Sequence
PEDV	Porcine epidemic diarrhea virus	NC_003436.1	Alphacoronavirus	Pig (Sus scrofa)	ANPEP	Porcine epidemic diarrhea	View Sequence
PRCoV	Porcine respiratory coronavirus	DQ811787.1	Alphacoronavirus	Pig (Sus scrofa)	ANPEP	Porcine respiratory disease complex	View Sequence
TGEV	Transmissible gastroenteritis virus strain PUR46-MAD	NC_038861.1	Alphacoronavirus	Pig (Sus scrofa)	ANPEP	Transmissible gastroenteritis	View Sequence
CCoV	Canine enteric coronavirus serotype II strain 1-71	JQ404409.1	Alphacoronavirus	Dog (Canis lupus familiaris)	ANPEP	Gastroenteritis	View Sequence
FCoV	Feline coronavirus serotype I strain Black	EU186072.1	Alphacoronavirus	Cat (Felis catus)	ANPEP	Feline infectious peritonitis	View Sequence
FIPV	Feline infectious peritonitis virus serotype II	NC_002306.3	Alphacoronavirus	Cat (Felis catus)	ANPEP	Feline infectious peritonitis	View Sequence
SARS-CoV-2	SARS-CoV-2 strain H1	NC_045512.2	Betacoronavirus	Human (Homo sapiens)	ACE2; Cell entry aided by TMPRSS2	COVID-19	View Sequence
BatCoV-RaTG13	Bat COVID-19-related coronavirus RaTG13	MN996532.1	Betacoronavirus	Chinese horseshoe bat (Rhinolophus sinicus)			View Sequence
SARS-CoV	SARS-CoV strain Tor2	NC_004718.3	Betacoronavirus	Human (Homo sapiens)	ACE2; Cell entry aided by TMPRSS2	SARS	View Sequence
BatCoV-WIV16	Bat SARS-related coronavirus WIV16	KT444582.1	Betacoronavirus	Chinese horseshoe bat (Rhinolophus sinicus)	ACE2		View Sequence
BatCoV-Rs4231	Bat SARS-related coronavirus Rs4231	KY417146.1	Betacoronavirus	Chinese horseshoe bat (Rhinolophus sinicus)	ACE2		View Sequence
BatCoV-RsSHC014	Bat SARS-related coronavirus RsSHC014	KC881005.1	Betacoronavirus	Chinese horseshoe bat (Rhinolophus sinicus)	ACE2		View Sequence
BatCoV-WIV1	Bat SARS-related coronavirus WIV1	KF367457.1	Betacoronavirus	Chinese horseshoe bat (Rhinolophus sinicus)	ACE2		View Sequence
HCoV-OC43	Human coronavirus OC43	NC_006213.1	Betacoronavirus	Human (Homo sapiens)	Sialic acid; Cell entry aided by TMPRSS2	Common cold	View Sequence
CRCoV	Canine respiratory coronavirus	JX860640.1	Betacoronavirus	Dog (Canis lupus familiaris)		Canine respiratory disease	View Sequence
BCoV	Bovine Coronavirus	NC_003045.1	Betacoronavirus	Cow (Bos taurus)	Sialic acid	Calf diarrhea and respiratory infections in all ages	View Sequence
PHEV	Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus	DQ011855.1	Betacoronavirus	Pig (Sus scrofa)		Porcine hemagglutinating encephalomyelitis	View Sequence
ECoV	Equine Coronavirus	EF446615.1	Betacoronavirus	Horse (Equus caballus)		Colic	View Sequence
HCoV-HKU1	Human coronavirus HKU1	NC_006577.2	Betacoronavirus	Human (Homo sapiens)	Sialic acid; Cell entry aided by TMPRSS2	Common cold	View Sequence
MHV	Mouse hepatitis virus strain A59	AY700211.1	Betacoronavirus	Mouse (Mus musculus)	Ceacam1	Mouse hepatitis	View Sequence
RCoV	Rat CoV strain Parker	NC_012936.1	Betacoronavirus	Rat (Rattus norvegicus)		Pneumonitis	View Sequence
MERS-CoV	MERS-CoV	NC_019843.3	Betacoronavirus	Human (Homo sapiens)	DPP4; Cell entry aided by TMPRSS2	MERS	View Sequence
BatCoV-HKU4	Bat MERS-related Coronavirus HKU4	NC_009019.1	Betacoronavirus	Lesser bamboo bat (Tylonycteris pachypus)			View Sequence
BatCoV-HKU5	Bat MERS-related coronavirus HKU5	NC_009020.1	Betacoronavirus	Japanese house bat (Pipistrellus abramus)			View Sequence
IBV	Infectious bronchitis virus	NC_001451.1	Gammacoronavirus	Chicken (Gallus gallus)	Sialic acid	Avian infectious bronchitis	View Sequence
TCoV	Turkey coronavirus	NC_010800.1	Gammacoronavirus	Turkey (Meleagris gallopavo)	Type 2 poly-N-acetyl-lactosamines	Gastroenteritis	View Sequence
PDCoV	Porcine deltacoronavirus	KJ584355.1	Deltacoronavirus	Pig (Sus scrofa)	ANPEP	Diarrhea	View Sequence

*注：红色为可以感染人类的病毒类型。

对于理解冠状病毒如何进入细胞，以及一种嗜性的冠状病毒如何演化导致病毒可以从一种宿主跨物种感染至另一种宿主的背后机制，研究不同冠状病毒的S蛋白如何与它们的宿主受体结合是十分重要的。但是这样的研究通常难以实施，这是因为一些有活性的冠状病毒毒株是危险的，比如说SARS-CoV-2这种病毒只能在生物安全三级（BSL-3）的实验室进行操作。

作为使用活性冠状病毒的替代方案，使用慢病毒进行人工重组获得的S蛋白假病毒是一个比较好的选择。慢病毒与冠状病毒一样都是包膜病毒，冠状病毒的S蛋白可以同样被引入到慢病毒的包膜结构上。表达有S蛋白的假型慢病毒（假病毒）可以模拟冠状病毒结合细胞表面受体进入细胞的过程。重组慢病毒本身是十分安全的，可以使用任何类型的冠状病毒的野生型或者突变型的S蛋白实现其假型化。

假病毒所使用的刺突蛋白（S蛋白）类型

自然界中冠状病毒是由一大群病毒组成的并可以感染我们所知的每一种哺乳动物。迄今已有数百种冠状病毒被发现。对于其中一些可以感染人类、牲口、宠物以及模式动物的类型，以及一些在演化上趋近于这些类型的，我们都尤为关注。这些备受关注的重要类型的冠状病毒系统发育树如下图所示

我应该如何获取S蛋白假病毒包装服务？

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SARS-CoV-2、SARS-CoV和MERS-CoV三种hCoVs引起的疾病临床表现都有严重急性呼吸道疾病的症状，研究该类疾病有效的小鼠模型，至少需要小鼠在攻毒后，表现出相似的病理变化，且能引起严重致死性呼吸道疾病。

小鼠模型具有成本较低、容易饲养、繁殖较快和产仔数较多等优点。但小鼠与人之间的存在一定的物种差异，导致一些人病毒无法直接感染小鼠，或病毒虽能在小鼠体内复制，却难以引起明显的症状。近交系小鼠的遗传背景具有一致性，在此基础上，对小鼠基因进行相应的编辑改造，从某种程度上可以克服野生型小鼠的短处，有助于研究宿主特定基因在病毒致病过程中作用，评价疫苗与药物安全性及有效性。

赛业生物作为一家专业的有社会责任感的模式动物公司，自疫情爆发以来便紧急召集公司的研发人员竭尽全力开发ACE2、DPP4、APN/ANPEP、TMPRSS2等多种冠状病毒关键受体的C57和BALB/c背景品系的人源化模型、基因敲除模型和Rosa26基因敲入小鼠模型，助力防疫攻坚。欢迎拨打 400-680-8038 或邮件至 info@cyagen.com 咨询订购。

● 活动时间：2020年5月1日——2020年6月30日 ● 活动对象：全国科研终端客户

● 活动内容：订购ACE2基因的C57背景品系的人源化模型、基因敲除模型和Rosa26基因敲入小鼠模型。

产品名称	交付数量	促销价（元）
ACE2基因敲除小鼠	≧3 只	9800
ACE2人源化小鼠	≧3 只	16800
ACE2基因敲入小鼠（Rosa26位点）	≧3 只	29800

备注：我们也可为您提供BALB/c背景品系的基因编辑小鼠，欢迎与我们联系。

有哪些潜在靶点基因编辑小鼠模型可用于冠状病毒的研究？

当前，冠状病毒的预防与治疗是科研界与医药界最紧急的研究热点。赛业生物专家团队成员深入调研与冠状病毒研究有关的靶点，希望能助科研人员一臂之力。

冠状病毒相关靶点小鼠模型	靶点在病毒感染中的作用
ACE2 敲除小鼠 cKO小鼠人源化小鼠基因敲入小鼠	● SARS-CoV-2与严重急性呼吸系统综合症冠状病毒（SARS-CoV）密切相关，与SARS共享相同的受体，即血管紧张素转化酶2（ACE2）； ● 病毒感染后，人源ACE2较鼠源ACE2对SARS-CoV的敏感性更强，病理症状更为明显；
DPP4 敲除小鼠 cKO小鼠人源化小鼠	● DPP4是冠状病毒受体的外肽酶； ● MERS-CoV S1与人DPP4直接特异性结合，导致中东呼吸综合征的发生； ● MERS-CoV RBD结合的结构特征有利于我们理解病毒和受体的相互作用，对于SARS-CoV-2感染宿主受体的研究可能有着重要的指导意义；
APN 敲除小鼠 cKO小鼠人源化小鼠	● APN与HCoV-229E冠状病毒的感染相关; ● 对于SARS-CoV-2感染宿主受体的研究可能有着重要的指导意义；
TMPRSS2 敲除小鼠 cKO小鼠	● 跨膜蛋白酶TMPRSS2参与ACE2与SARS-CoV-2膜融合过程； ● 可激活高致病性人冠状病毒的突触蛋白；
ADAM17	● SARS S蛋白与ACE2的结合，触发了ADAM17对ACE2的切割，有助于ACE2脱落到血管内皮细胞中，促进SARS-CoV进入细胞； ● ADAM17与TMPRSS2在结合ACE2方面存在竞争关系；
LY6E cKO小鼠	● 参与病毒感染的调节； ● 可以调节包括宿主免疫应答在内的细胞信号转导，这对病毒感染的预防非常重要； ● LY6E通过干扰spike蛋白介导的膜融合来抑制冠状病毒进入细胞；
SIGN（CD209L）	● L-SIGN的纯合性在SARS感染期间对机体起保护作用； ● SARS-CoV可能通过S蛋白上的高甘露聚糖与质膜上的CD209L结合，然后介导病毒进入宿主细胞；
CD147	● SARS研究中已证明，CD147促进SARS-CoV侵袭宿主细胞； ● CD147可能作为SARS-CoV-2 Spike蛋白的宿主受体，参与病毒与细胞之间的相互作用，帮助病毒入侵； ● CD147可作为抗病毒药物开发的新靶标；
DHODH cKO小鼠	● 二氢乳酸脱氢酶（DHODH）的新型有效抑制剂针对RNA病毒具有广谱抗病毒感染的特点； ● RNA病毒可能对DHODH活性更敏感，DHODH对RNA病毒复制过程有重要作用；

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