Takara mRNA体外转录解决方案

mRNA技术在疫苗领域取得了有目共睹的成绩。mRNA疫苗不仅可以促进体液免疫、细胞免疫，还可以诱导机体的固有免疫系统。充分利用分子生物学、基因工程、生物化学等方法，让mRNA的结构设计也更具便捷性。mRNA表达无需入核，大大降低了整合风险。体外无细胞、工程化的生产方式，利于实现标准化。以上种种，吸引了生物医药、生物技术企业纷纷布局mRNA平台，进一步丰富了mRNA技术在应用端的表现，如癌症的免疫治疗、基因编辑疗法等等。

2022年12月5日，Takara Bio Inc. 正式入选日本厚生劳动省《疫苗生产体系等紧急制备企业（第3次公募）》。Takara Bio Inc. 提供丰富的mRNA体外转录原料酶及研究工具，并持续推进现有产品的升级与新产品开发工作。在中国，Takara Bio Inc. 拥有完善的生产和销售体系，助力mRNA产业化进程。

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Takara mRNA体外转录解决方案

原料酶

模板制备——高效率、更好重复性的无缝克隆试剂In-Fusion^® Snap Assembly

In-Fusion技术利用In-Fusion酶，通过识别DNA片段（例如PCR片段和线性化载体）末端15 bp的同源序列来实现高效、准确地融合。

制品特点 •  可在任意载体的任意位置进行定向克隆 •  操作简单方便，无需进行反复的酶切连接 •  对于50 bp～15 kb的插入片段，克隆效率可超过95% •  EcoDry™ 冻干、预分装形式易用性强且一致性高 •  最终构建载体无多余碱基

【预混型试剂】In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix（Code No. 638947/48/49）
【冻干型产品】In-Fusion^® Snap Assembly EcoDry™ Master Mix（Code No. 638954/55/56）

模板制备——限制性内切酶

BspQⅠ（Code No. 1227A/B）

识别位点	制品特点 •  不对称特定双链DNA序列识别位点 •  mRNA合成模板Poly (A)尾无残余碱基 •  试剂中均不含BSA成分

HindⅢ、XbaⅠ、BamHⅠ

HindⅢ、XbaⅠ、BamHⅠ同样供应快切酶产品——QuickCut™

RNA体外转录

T7 RNA Polymerase ver.2.0（Code No. 2541A）

以含有T7启动子序列的双链DNA为模板，以NTPs为底物，转录启动子下游区域，合成与模板互补的单链RNA。与附带的buffer一起用于体外转录 (IVT) 反应时，可以大量制备高质量的RNA。20 μl 反应体系RNA合成量较先前T7 RNA Polymerase（Code No. 2540A/B）提高约7倍！

案例 FLuc RNA（～1.9-kb）体外合成，20 μl

Recombinant RNase Inhibitor ver.2.0（Code No. 2315A/B）

本制品特性与猪肝或者人胎盘来源的RNase Inhibitor相似，并对半胱氨酸残基引入突变，提高了稳定性。与RNase A形成1：1复合体，抑制RNase活性，抑制作用可逆。本制品易去除，且不抑制RNase H活性。

案例 16S/23S rRNA测试本制品抗氧化性

Takara Bio Inc.比较数据

RNA加帽修饰

在真核生物中，帽结构对于mRNA的稳定，出核转运以及翻译起到重要作用。

•  Vaccinia Capping Enzyme（Code No. 2460A/B），源于牛痘病毒的加帽酶，在RNA的5’末端(5’-三磷酸RNA)加上7-甲基鸟苷酸结构（Cap 0）。

•  mRNA Cap 2’-O-Methyltransferase（Code No. 2470A/B），源于牛痘病毒的甲基化酶，该酶特异性地甲基化5’端具有7-甲基鸟苷酸结构的Cap-0 RNA第一个核苷酸的2’-O，从而产生Cap 1 RNA。

简单高效的合成方法

•  可通过一步法，为RNA添加Cap-1结构
•  与帽类似物共转录法相比，更高的加帽效率
•  灵活的适应性，广泛的底物接收度

案例 一步法 vs 两步法加帽mRNA翻译效果比较

Takara Bio Inc.比较数据

mRNA体外转录“多合一”试剂盒

Takara IVTpro™ mRNA Synthesis System（Code No. 6141）

包含从DNA模板制备到mRNA体外转录所需主要工具。适用于mRNA体外转录相关研究。

制品特点 •  通过体外转录方式合成带Cap结构、Poly(A)结构的mRNA •  In-Fusion无缝克隆技术轻松构建DNA模板 •  优化的体外转录反应体系，RNA合成效率高、产量大 •  四种NTPs采用独立包装形式，便于修饰替换，且不影响产量

▶  载体构建模块：Cloning Kit for mRNA Template（Code No. 6143）
▶  体外转录与产物纯化模块：Takara IVTpro™ T7 mRNA System Kit（Code No. 6144）

Cloning Kit for mRNA Template（Code No. 6143）为用户提供预线性化的DNA模板制备载体，已包含T7启动子、转录起始序列（AGG）、5’－UTR、3’－UTR以及105-base Poly(A)序列。Cloning Kit整合了Takara In-Fuison®无缝克隆技术，高效快速地帮助用户完成mRNA体外转录所需的DNA模板制备工作。
Takara IVTpro™ T7 mRNA System Kit（Code No. 6144）为用户提供了mRNA体外合成所需的体系组分，包括Takara最新推出的T7 RNA聚合酶 ver.2.0（2541A），以及反应后消化模板所需的DNaseⅠ、纯化mRNA所需的LiCl溶液。另外，独立包装的NTPs便于修饰NTPs替换。本品配合CleanCap Reagent AG（TriLink公司的5’帽类似物），可高效制备含5’帽子结构的mRNA。每次反应（20 μl体系）可合成高达200 μg或更多mRNA。※5’帽类似物不包含在本产品中。

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