从培养的细胞中提取RNA大约需要45分钟,操作复杂,大部分研究人员却仍然使用这种传统的基因表达分析方法。
Takara给您一个全新的选择!
快速、方便、简单的操作体验:CellAmp系列让您能够在10 分钟内提取RNA,且操作极其简单,最短1.5小时即可完成从RNA提取、反转录到qPCR的全过程。
CellAmp的特点,不只【节省时间】这一点!
★ 细胞裂解代替RNA提取,无需加热失活DNase,适用于高通量分析
• 无需进行RNA提取,可直接以细胞为模板制备样品。
• 新品裂解液CellAmp? Direct Lysis set(Code No. 3738A)不需要反转录反应前DNase失活的热处理操作,减少了操作的繁杂性。分析时间大幅缩短(最短约1.5小时)。
• 适用于高通量分析。
★ iPS细胞等干细胞分化而来的细胞也可以使用
• 通过对裂解buffer的改良,cell line化的贴壁细胞、悬浮细胞、原代培养细胞、各种干细胞、iPS细胞等均可以使用。
★ 裂解液可长期保存
• 新品CellAmp裂解液3738,增加了组分Stop Solution, 提高了裂解液的稳定性。
• -20℃可稳定保存6个月。
★ Real Time PCR试剂具有强抗阻害性和高特异性
• 经典CellAmp裂解液3732,可兼容大多数Takara两步法或一步法RT-qPCR试剂。
• 新品CellAmp裂解液3738,搭配qPCR试剂TB Green? Fast qPCR Mix (Code No. RR430) 和Probe qPCR Mix (Code No. RR391), 实现了对PCR阻害物的强抵抗性。稍长的目的基因和高 GC 含量的目的基因也可以扩增。
下面我们用数据说话!
实验例1.使用CellAmp与使用纯化的RNA作为模板,结果有差异吗?
【实验方法】
• 样本:HeLa细胞、Jurkat细胞、HEK293细胞、NHDF细胞、iPS 细胞 (253G1, STO+)
• 方法:使用CellAmp 试剂制备细胞裂解物 vs 常规柱法从每种细胞中纯化total RNA。
• 目的基因:每种细胞,对应使用包含88种生物通路相关基因和8种管家基因引物对的PrimerArray系列,进行RT-qPCR解析。
【试剂】
CellAmp™ Direct TB Green® RT-qPCR Kit (Code No. 3735)
【实验结果】
以纯化的total RNA作为模板得到的Ct值,与以CellAmp试剂裂解液作为模板得到的Ct值,相关性良好。
即使样本是iPS细胞,使用CellAmp也可以轻松检测基因表达水平。
实验例2. CellAmp与其他品牌的同类产品比较,性能怎样?
【实验方法】
• 样本:HeLa细胞、Jurkat细胞、HEK293细胞
• 试剂:CellAmp vs T公司同类产品
• 操作方法区别:细胞裂解结束后,加入Stop Solution,吸打混匀。CellAmp无需其他操作;T公司产品需要额外室温孵育2 min的步骤。
• 该实验比较了加入Stop Solution后孵育不同时间的Ct值。
孵育时间分别为:0 min,2 min,20 min,30 min,60 min
【实验结果】
使用T公司产品时,Stop Solution后孵育2 min的步骤必不可少的,但结果依然可能不稳定,得到不同的Ct值。
使用CellAmp试剂时,添加Stop Solution后,无需在室温下孵育细胞裂解液,操作更容易,并且可以获得更稳定的结果。
细胞裂解、反转录、qPCR,您可以选择所需的组分,也可以选择完整解决方案。
CellAmp系列产品一直在默默努力,满足您所想所需。
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• 不同时期的iPS诱导细胞作为样本,不纯化RNA,qPCR效果是否依然出色呢?
• 使用CellAmp进行不纯化RNA的探针法qPCR,结果会不会逊于常规方法?
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