电泳基础知识介绍
电泳是生物学研究经常使用的技术手段之一。
Takara电泳产品线提供多种产品选择和令人放心的产品质量。从各种电泳仪器，电泳仪器配件，到电泳试剂耗材，再到耐心的实验问题解答，Takara就是您可以信赖的电泳实验助手。
一、原理：
电泳是分离、纯化和鉴定核酸的一种常用方法，目前实验室中常用到的是琼脂糖凝胶电泳，其利用琼脂的主要成分琼脂糖(Agarose) 作支持介质进行电泳，适合分离、纯化200 bp-50 kb长度的核酸片段，且可高纯度、高效地从凝胶中回收分离的核酸。
其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是，它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。
琼脂糖凝胶具有类似网络的结构，当DNA在网状结构中移动时，大的DNA被网状物捕获，移动速度慢，小的DNA不容易被网状物捕获，移动速度快，利用这一性质，可以根据长度分离出DNA。此外，DNA在水溶液中带负电荷，所以在电场中会向正极移动。
二、流程
■ 电泳用buffer作用
电泳用buffer是一种具有缓冲能力的离子溶液，它的主要作用是：
①在电泳过程中，维持溶液的pH稳定。
②使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移。
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电泳用buffer优缺点
实验室中常见的核酸电泳缓冲液主要是TAE（Tris-Acetate-EDTA）和TBE（Tris-Borate-EDTA）这两种，两者的区别是：
| 电泳用buffer |
优点 |
缺点 |
| TAE |
- 可更好地分离大片段
- 超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量
- 双链线状DNA在其中的迁移率较TBE快约10%
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- 缓冲能力低；更适用于短时间运行
- 更容易导致凝胶过热
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| TBE |
- 对于较小片段的分离效果更好
- 缓冲能力强；适用于长时间运行
- 不易导致凝胶过热
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- 电泳显示的相对分子质量会大于实际分子质量
- 不宜在回收DNA片段的电泳中使用
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■ 电泳用buffer制备
实验室经常会将TAE或TBE配制成高浓度的储备液，实验前稀释储备液到1×的工作液。配制方法虽然不算难，但是需要前期采购原料、适当保存、称量、溶解、调整pH等，配制过程比较繁琐、枯燥，并且耗时较长。
这里向大家强烈推荐Takara的电泳缓冲液方便装，采用干粉的形式，方便运输及储存，使用时无需称量试剂，只需将每包产品加入定量的水或去离子水溶解，即可简便、快速的制备1L的TAE或TBE电泳缓冲液。
此外，Takara还提供其他用于一般分子生物学实验的常用缓冲液方便装，详见下表：
■ 琼脂糖凝胶制备方法及注意事项：
① 配制缓冲液：配制适量的电泳及制胶用的缓冲液（通常是 0.5×TBE 或 1×TAE）。
② 加入胶粉：根椐制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶或平底烧瓶中，加入准确称量的琼脂糖粉（总液体量不宜超过锥瓶或烧瓶的 50%容量）。 
注意事项：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。
③ 溶胶：在锥瓶或烧瓶的瓶口上盖上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热溶解琼脂糖。加热时，当溶液沸腾后，请戴上防热手套，小心摇动锥瓶或烧瓶，使琼脂糖充分均匀溶解。此操作重复数次，直至琼脂糖完全溶解。
注意事项：在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。溶解琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全溶解，否则，会造成电泳图像模糊不清。 
④ 加入溴化乙锭：使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴化乙锭溶液（终浓度 0.5 μg/ml），并充分混匀。
注意事项：溴化乙锭是一种致癌物质。使用含有溴化乙锭的溶液时，请戴手套。
⑤ 倒胶：将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在 3-5 mm 之间。
⑥ 凝胶：在室温下使胶凝固（大约 30 分钟-1 小时），然后放置于电泳槽中进行电泳。
注意事项：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存，一般可保存2-5天。
■ 琼脂糖的选择：
琼脂糖(Agarose)凝胶电泳是检定、分离DNA片段的重要手段，进行琼脂糖凝胶电泳时，琼脂糖的纯度会直接影响DNA的分辨能力及电泳结果的清晰度。如琼脂糖中混有其他糖、盐及蛋白质，会影响DNA在凝胶中的迁移速度以及回收后的DNA片段进行酶促反应时的反应性能。因此，使用高质量的琼脂糖对实验的成功非常重要。
推荐Takara的Agarose Regular（Code No. 5260），适合于制作0.5～2%的琼脂糖凝胶，物理性质如下：
在进行琼脂糖凝胶电泳时，Marker作为一种参照，可以用来对比和确定目的条带的大小。
Takara品牌的Marker出身名门，有着大品牌的品质；经典的产品，却有着亲民的价格，是您的明智之选！
■ 电泳&染色流程图：
■ 电泳详细操作步骤：
① 装胶：将上一步骤制备好的琼脂糖凝胶放置在电泳槽中，将缓冲液填充到凝胶完全浸泡的程度。
② 安装电极：因为DNA是朝着正极流动的，所以正极和负极的方向不要弄错。
③ 上样：PCR反应液和loading Buffer混合后，上样到胶孔中。
④ 电泳：按下电源，开始进行电泳。
推荐Takara的Mupid-One（Code No. AD160），仪器特点如下：
 
⑤ 凝胶成像：如果是前染色（制胶过程中已加入染料）的话，电泳结束后，可直接将电泳胶放入凝胶成像仪中，拍照分析。
如果选择电泳后染色，只要找一个大的培养皿之类的容器，加入EB等染料的稀释液，放入凝胶后缓慢振荡15分钟左右即可，两者的区别是：
之后放入凝胶成像仪中，拍照分析。
⑥ 扩增产物确认：对电泳后凝胶成像的照片进行分析、确认。
PCR产物经电泳后，常常需要对一些DNA电泳片段进行回收和纯化，用于后续连接反应、PCR扩增、DNA测序等。
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