约“惠”Capturem™膜技术,药物分析DMPK研究流程新突破!
质谱(Mass spectrometry, MS)是一种非常灵敏和特殊的分析技术,可以准确地确定样品中化合物的性质和数量,因而被用于许多不同的应用。在学术界,MS主要用于探索单个蛋白质的功能及其在复杂生物系统中的作用。在制药工业中,MS被用来测量蛋白质丰度的变化,以用于新药和候选药物的定性和定量分析、药物代谢和药代动力学(PK)研究等。
质谱分析中最重要的步骤是样品制备,需要将蛋白质转化为肽,通常需要4个小时甚至过夜,Takara的Capturem™ Trypsin和Pepsin可快速、有效、完全地消化蛋白质样品,在室温下让MS工作流程更加连贯。该系列产品应用我们的新型Capturem™膜技术,膜上固定有胰蛋白酶(Trypsin)或胃蛋白酶(Pepsin),仅需2-3分钟的时间即可高效消化蛋白质样品,能进行独立样品酶解,也可进行96-well的高通量酶解操作。不仅可以节省时间,还可以通过减少胰蛋白酶自溶来改善蛋白质组学分析中肽和蛋白质的鉴定。
使用Capturem™消化时间只需2分钟,不需要过夜!
Capturem™ Trypsin酶解产物具有高度重复性!
药物分析DMPK研究样本量庞大,选择准确性高、重复性好的方法对于获得真实可靠的实验数据至关重要。以Capturem™ Trypsin 96-Well Plate为例,对3个不同孔进行稳定性和重复性验证,结果显示,Capturem™技术可以满足DMPK研究中数量庞大的样品对酶解消化处理稳定性和重复性的要求,是实现高通量和自动化检测的必要前提。
在天然条件下,选择Capturem™ Trypsin 96-Well Plate的3个不同孔对80 μg的肌红蛋白(Apo)进行消化。HPLC结果显示,Capturem™ Trypsin酶解消化的产物具有很高的重复性。
使用Capturem™ Pepsin自溶片段更少,有效避免过度消化!
酶的自身降解以及对目标蛋白质的过度消化是溶液法处理样品时常会遇到的问题。酶的自身降解会导致图谱中出现不同程度的高强度蛋白酶自身降解峰,可能会减弱目标肽段峰的强度,在二级质谱鉴定时无法获得较好的离子碎片图谱;对目标蛋白质的过度消化则会产生过多的小肽段,降低信号肽的特异性,影响最终的检测和分析结果。而Capturem™技术因其膜结构的设计,有着处理时间短、酶与样品接触充分的优势,所得到的肽段更长,特异性更好,并且分布均匀,色谱峰没有过度重叠的现象。
Capturem™ Pepsin与pepsin溶液法消化结果比较。对50 μg 的anti-HER2单克隆抗体使用3种方法进行酶解消化,分别是Capturem™ Pepsin,pepsin溶液法孵育4小时,pepsin溶液法孵育过夜。然后进行质谱分析。由上图可以看出,使用溶液法的消化产物峰左移并且总体峰的数量较多,说明产生了过度消化,而使用Capturem™ Pepsin则没有这个问题。
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