MicroRNA全解决方案

       华安平康生物是由哈佛大学和耶鲁大学留学回国科学家团队创办的生物高科技公司,专注于非编码RNA的产品开发与生产、技术研发与服务,是中国非编码RNA领域的开拓者和领军企业。主要销售以下几类产品与服务:

1
microRNA(miRNA)荧光定量PCR引物与试剂盒
5
miRNA荧光定量表达谱分析服务
2
人miRNA前体表达载体
6
常规克隆服务
3
miRNA靶基因验证服务
7
shRNA表达载体构建服务
4
miRNA荧光定量PCR检测服务    

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产品及服务详细介绍如下:

   1、miRNA荧光定量PCR引物与PCR试剂盒

       提供Stem-loop(图1)和加Poly(A)尾(图2)两种类型的miRNA qRT-PCR的引物供客户选择,可满足常规的科研检测需求,特别适合少量样本的准确检测。100%覆盖 miRBase中microRNA人源、大鼠源和小鼠源。同时可以适用于SYBR Green和Taq-Man探针两种方法的荧光定量PCR检测试剂盒,用于多种miRNAs的检测,产品规格多样灵活,适合少量及多次qPCR实验。

图1:Stem-loop miRNA qRT-PCR检测试剂盒
图2:加Poly(A)尾 miRNA qRT-PCR检测试剂盒

   2、人源miRNA前体表达载体

        华安平康构建了能表达miRNA前体的慢病毒载体,目前能提供人类全基因组miRNA前体的表达载体。U6启动子驱动包括前体茎环(stem-loop)结构和前体上下游各100-150个碱基的基因组序列的miRNA前体转录,通过细胞内RNAi的酶系加工产生成熟的miRNA。载体上还含有puromycin抗性基因和eGFP荧光素酶报告基因。可用于研究miRNA与靶基因互作的验证,也可用于瞬时转染或构建稳定表达细胞株研究miRNA的功能。同时30000种人源、小鼠源和大鼠源的3′UTR荧光素酶报告基因靶标库,可用于miRNA的靶标验证和表达调控检测。

   3、miRNA靶基因验证服务

      提供检测miRNA与靶标基因相互作用的服务。将miRNA靶基因的3’UTR克隆到含双荧光素酶报告基因载体的海肾荧光素酶基因下游的XhoI和BamHI克隆位点(若目的片段中含有以上酶切位点,也可以用它们的同尾酶SalI或BglII做为目的片段的酶切位点)。如果miRNA与克隆的3’UTR靶标相互作用,通过测定两种荧光素酶的活性比值可以获得miRNA对靶标的调控作用的结果。该检测可以方便地用于单个或多个miRNA与靶基因的验证检测、全基因组范围内miRNA对靶基因的检测和阳性作用位点的突变检测服务。
1)一个miRNA与一个基因的检测结果(图3)

图3.特定miRNA对特定靶标克隆的调控作用图
图4. 多个miRNA对特定基因靶标的调控作用图

(2) 几个至几十个miRNA与一个基因的检测结果(图4)

(3) 全基因组范围miRNA针对一个基因的检测结果(图5)

图5.在全基因组范围内针对一个基因筛选调控作用的miRNA

   4、miRNA荧光定量PCR检测服务

      对于不同阶段、不同样本以及不同种类的miRNA的表达水平是各不相同的,因此高灵敏度的检测工具对于miRNA的定量分析来说是非常重要的。MiRNA qRT-PCR定量检测服务采用SYBR Green qRT-PCR方法检测特定miRNAs分子在不同样本间的表达情况。

(1)单个miRNA在感兴趣样本和对照样本中的qRT-PCR检测结果(图6)

图6. 一个miRNA在病人样本和对照样本
中qRT-PCR检测结果及数据分析图
图7. 多个miRNA在感兴趣样本和对照样本
中qRT-PCR检测结果及数据分析图

(2)多个miRNA在感兴趣样本和对照样本中的qRT-PCR检测结果(图7)

(3)特定miRNA在多个组织样本中的qRT-PCR检测结果(图8)

8. 某个特定的miRNA在不同样本间qRT-PCR检测结果及分析图

   5、miRNA表达谱分析

      为了鉴定差异表达的miRNA,我们公司采用SYBR Green qRT-PCR检测方法,通过独特的茎环结构反转引物或者加Poly(A)尾形式,对两个或多个样本进行表达谱分析服务,所检测的miRNA涵盖miRBase 18.0版本的1921个成熟miRNA。
(1)Stem-loopG miRNA qRT-PCR表达谱分析服务(图9)
(2)加poly(A)尾 miRNA qRT-PCR表达谱分析服务

图9. 检测1900多个miRNA在癌和癌旁组织中的相对表达情况。
其中有1200多个在检测的范围内有表达

   6、常规克隆

      提供cDNA 和promoter的常规克隆服务。根据客户要求设计特异性引物,通过PCR方法从cDNA或基因组中克隆客户感兴趣基因。

   7、shRNA表达载体的构建

      提供shRNA表达克隆订制服务。采用慢病毒系统,以U6启动子驱动克隆的shRNA表达,同时载体上还包括puromycin抗性基因和eGFP荧光报告基因相应表达,以利于miRNA的功能筛选和miRNA表达示踪。
 



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