microRNA(简称miRNA)是一种长约22个nt(核苷酸)的内源性RNA分子,通过与靶标mRNA的互补配对,可抑制mRNA的裂解和翻译,从而在动植物体内发挥重要的调控作用。据推测,在人体和鼠体内存在上千种miRNA,因此对于miRNA的各种研究(例如对功能不明的新型miRNA的鉴定以及对与特定疾病相关的miRNA功能的说明等)迅速发展成为一大研究领域。近来,血清中存在miRNA这一重大事实的发现,开创了利用miRNA作为生物标志物进行包括癌症在内的疾病治疗的医学未来。一般认为,microRNA发挥作用的方式如下: 先在细胞中经过多个阶段发育成熟,再与蛋白质结合生成蛋白质复合物“RISC”(“RNA诱导沉默复合物”),然后与RISC主要组成部分AGO亚族蛋白结合,最后再与靶标mRNA结合,从而达到降解mRNA链或抑制翻译的目的。
人体中存在4种AGO亚族蛋白(hAgo1~hAgo4),可泛表达基因信息,但表达水平因类型而异。在AGO亚族蛋白中,只有AGO2具备对靶标RNA裂解的切割酶活性,因此是一种最具表达水平的蛋白质,可在miRNA合成途径中发挥至关重要的作用。由于RISC能够与AGO蛋白抗体发生免疫沉淀,因此可从RISC沉淀物中回收miRNA;而且进一步研究表明,靶标miRNA为共沉淀剂,因此免疫沉淀成法为研究miRNA功能的基本方法。
鉴于上述情况,和光纯药特别推出了众多对miRNA功能进行分析的工具,其中主要为利用抗AGO抗体的miRNA研究工具。通过组合使用上述工具,即可实现对miRNA和mRNA(存在于细胞和组织中的RISC的组成成分)的综合分析— miRNA分析和靶标mRNA分析。
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和光纯药microRNA克隆试剂盒可以用于制备cDNA编码microRNA,只需在microRNA片段制备后的1.5日之内即可完成克隆过程。该试剂盒中含有从虾中提取的碱性磷酸酶(SAP),能与其中的耐热性单链DNA连接酶(另售)和原改良接头发生连接反应。与传统方法(利用从细菌中提取的碱性磷酸酶和T4 RNA连接酶)相比,克隆效率显著提高。
特点:
- 1) 耐热性连接酶能够实现接头的准确连接,从而提高克隆效率
- 2) 适用于microRNA克隆以形成二级结构
- 3) 操作简单,只需在1.5日之内即可生成cDNA编码microRNA
- 和光microRNA克隆试剂盒(8次反应;和光Cat.No.:290-66501)
接头连接高效、准确、简捷
- 耐热性单链DNA连接酶重组体解决方案(200个单位(和光Cat.No.:298-65103);500个单位(和光Cat.No.:292-65101)
- 和光靶标mRNA克隆试剂盒(10次反应;和光Cat.No.:298-68001)
和光纯药生产的靶标mRNA克隆试剂盒用于借助微量mRNA实现cDNA扩增,尤其是利用AGO IP RNA片段实现microRNA靶标mRNA克隆。扩增后的cDNA将成为microRNA的靶标mRNA。
特点:
- 1)方法简易
- 2)具备实现微量mRNA扩增的性能
- 3)cDNA扩增方式不依赖于mRNA的长度
- 4)适用于microRNA靶标mRNA的研究
- 和光PCR纯化试剂盒(30次反应(和光Cat.No.:298-67901)
和光纯药生产的PCR纯化试剂盒,用于在利用RT-PCR或PCR完成DNA合成后的仅10分钟内去除在各种分子生物学试验反应缓冲液中形成的引物、引物二聚体、dNTP(三磷酸脱氧核苷酸)以及诸如DNA聚合酶、限制性内切酶等多种酶。
- THUNDER Taq Gold DNA聚合酶(不含镁离子的缓冲液)
(250个单位;和光Cat.No.:317-07081):PCR(聚合酶链式反应)用耐热性DNA聚合酶
建议采用THUNDER Taq Gold DNA聚合酶(不含镁离子的缓冲液)来抑制非特异性扩增。THUNDER Taq Gold DNA聚合酶用于PCR的热启动,在进入PCR循环前,在95℃的温度下经过10分钟的热处理后被活化。由于利用THUNDER Taq Gold DNA聚合酶(不含镁离子的缓冲液)方式实现扩增后的DNA片段是一种腺嘌呤的3'末端, 因此能够直接插入到T载体中。
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