EvaGreen™ qPCR荧光染料

一种被广发用于实时定量PCR的绿色荧光DNA染料

特    点：
• 极高的灵敏度
在推荐浓度下使用时可以获得最强的PCR扩增信号。
• PCR抑制性极小
智能化的“按要求释放”DNA结合技术使得EvaGreen对PCR的抑制远小于SYBRTM Green I。
• 和快速PCR兼容
对PCR干扰极小，从而极大的缩短了PCR延伸时间。
• 非常适合高分辨率熔解曲线分析
无“染料重分布”缺陷，兼容PCR后的高分辨率熔解曲线分析。
• 兼容多重PCR
在推荐浓度下使用时，无扩增子之间的染料迁移现象。
• 超强的稳定性
在大部分生化条件下非常稳定，可在室温下储存并可反复冻融。
• 优越的兼容性
和 SYBR™ GREEN I光谱相似,和各知名品牌的 qPCR 仪器兼容。用 EvaGreen™ 替代 SYBR Green 1 ，毋须改变任何您目前使用的操作步骤和仪器设备。

	图 1．分别使用 EvaGreen®（红色）、SYBR GreenER™ （绿色，Invitrogen）和 Power SYBR™（黄色，ABI ）扩增 Myc 基因片段（75ng huDNA ，ABI）。所有反应均以复管形式使用相同的循环条件（95 ℃ 15 秒，60 ℃ 60 秒）在 ABI 7900 上完成。
	图 2 . 在 Rotor Gene 6000 上使用 EvaGreen 进行高分辨率熔解曲线（ HRM）分析可以明显的区分三个不同的基因型：突变型（红色）、杂合型（紫色）和野生型（蓝色）。（数据由 Corbett Research 提供）

EvaGreen™ 无细胞膜透性，安全性优于SYBR™  Green I

图 5. 在37℃下分别用SYBR™ Green I（1.2μM，左图）和EvaGreen™（1.2μM，右图）孵育Hela细胞并用荧光显微镜观察。30min内未观察到EvaGreen™ 染色细胞。但SYBR™ Green I孵育5min后观察到明显的细胞染色（数据未提供）。30min后，SYBR™ Green I组细胞核内观察到大量绿色荧光（左图）。SYBR™ Green I能快速进入细胞，加上它已知的诱变增强性（Ohta et al. Mutation Research 492, 91(2001)），使它在常规PCR操作中存在潜在毒性。相反，EvaGreen™ 似乎完全没有细胞膜透性，这至少部分解释了艾姆斯氏测试中无诱变性无细胞毒性的结果。（EvaGreen™ 完整的安全性报告可以从Biotium网站上下载）

       EvaGreen^® 是一种用于实时定量 PCR（qPCR）的 DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于 SYBR Green I。除了有相似的光谱特性，EvaGreen 有三个主要特点使它区别于 SYBR Green I。

       首先，EvaGreen 对 PCR 的抑制性远小于 SYBR Green I。因此，使用 EvaGreen 进行的 qPCR 实验可以使用快速 PCR 步骤。同时，EvaGreen 在实验中可以使用较高的浓度，从而获得远强于 SYBRGreen I 扩增信号（图 1）。较高浓度的 EvaGreen 也消除了“染料重分布”的缺陷，使 EvaGreen 既可用于多重 PCR ，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲线分析（ HRM ）（图 2）。该分析正被越来越多的用于 PCR 后的基因分型和异源双链分析 。由于 SYBR Green I对 PCR 的抑制性，从而要求其使用浓度必须很低，因此 SYBR GreenI 无法解决由低浓度造成的染料重分布问题，既不能用于多重 PCR 也不能用于 HRM 。同时，染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性，因为低熔点的 DNA 链可能由于这种原因而无法检测到 。

       另外，EvaGreen的稳定性极强。在正常的储存、操作和 PCR 过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以安全的储存在室温或冰箱里，也可以反复冻融。与之相反，SYBR Green I不稳定而且降解后对 PCR 抑制性更强 。

       EvaGreen 降低了细胞膜透性，因而比 SYBR Green I更加安全。独立实验室的测试结果显示，EvaGreen 既没有诱变性也没有细胞毒性。相反，虽然 SYBR Green I本身诱变性很弱，但它在细胞中可能抑制了正常 DNA 的修复机制，使其有诱变增强作用。考虑到 PCR 的广泛使用，其安全性应该足够重视。要获取 EvaGreen 安全性测试报告，请到 www.biotium.com或 www.bio-ope.com 网站下载。

参考文献：

EvaGreen in ddPCR
Athamanolap, P.,Shin, D. J., and Wang, T. H. (2013). Droplet Array Platform for High-Resolution Melt Analysis ofDNA Methylation Density. J Lab Autom. 10.1177/2211068213507923 (HRM, DNA methylation)
Fraley, S. I.,Hardick, J.,Jo Masek, B.,Athamanolap, P.,Rothman, R. E.,Gaydos, C. A.,Carroll, K. C.,Wakefield, T.,Wang,T. H., and Yang, S. (2013). Universal digital high-resolution melt: a novel approach to broad-based profiling ofheterogeneous biological samples. Nucleic Acids Res 41, e175. 10.1093/nar/gkt684 (U-dHRM bacteria diagnostics)
McDermott, G. P.,Do, D.,Litterst, C. M.,Maar, D.,Hindson, C. M.,Steenblock, E. R.,Legler, T. C.,Jouvenot, Y.,Marrs, S.H.,Bemis, A., et al. (2013). Multiplexed target detection using DNA-binding dye chemistry in droplet digital PCR.Anal Chem 85, 11619-11627. 10.1021/ac403061n (Evagreen multiplex in biorad ddPCR)。
Miotke, L. K.,Lau, B. T.,Rumma, R. T., and Ji, H. P. (2014). High Sensitivity Detection and Quantitation of DNA CopyNumber and Single Nucleotide Variants with Single Color Droplet Digital PCR. Anal Chem. 10.1021/ac403843j

EvaGreen in High Resolution Melt analysis
Athamanolap, P.,Shin, D. J., and Wang, T. H. (2013). Droplet Array Platform for High-Resolution Melt Analysis ofDNA Methylation Density. J Lab Autom. 10.1177/2211068213507923 (HRM, DNA methylation)
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Kozina, V.,Cappallo-Obermann, H.,Gromoll, J., and Spiess, A. N. (2011). A one-step real-time multiplex PCR forscreening Y-chromosomal microdeletions without downstream amplicon size analysis. PLoS One 6, e23174.10.1371/journal.pone.0023174
Li, Y. D.,Chu, Z. Z.,Liu, X. G.,Jing, H. C.,Liu, Y. G., and Hao, D. Y. (2010). A cost-effective high-resolution melting
approach using the EvaGreen dye for DNA polymorphism detection and genotyping in plants. J Integr Plant Biol 52,1036-1042. 10.1111/j.1744-7909.2010.01001.x

订货信息：

编号	产品名称	规格
31000	EvaGreen 20X in water	5x1 mL
31003	Fast EvaGreen Master Mix for qPCR and HRM(200 rxn)	2 x 1mL
31003-1	Fast EvaGreen Master Mix for qPCR and HRM(500 rxn)	5 x 1mL
29050	Cheetah Hot Start Taq DNA Polymerase	500 units (100uL)

相关试剂盒：

编号	产品名称	规格
31041-1	Forget-Me-Not qPCR Master Mix (500 reactions)	5x1 mL
31042-1	Forget-Me-Not qPCR Master Mix with ROX (500 reactions)	5x1 mL
31043-1	Forget-Me-Not Universal Probe Master Mix (500 reactions)	1kit
31044-1	Forget-Me-Not Universal Probe Master Mix with ROX (500 reactions)	1kit