QIAgenes 预制蛋白表达载体
      QIAgenes 预制蛋白表达载体（QIAgenes Expression Kit）是QIAGEN和GENEART合作推出，专门针对35，000个人类基因所设计，目的在于解决人类蛋白表达瓶颈难题。为优化人类蛋白在E.coli 、昆虫细胞和哺乳动物细胞中表达所设计。 采用最权威的Gene Optimizer™ 软件，对DNA序列进行以下方面优化：

  • 密码子优化
  • 调整编码序列GC含量
  • 最小化mRNA二级结构
  • 避免重复序列
  • 避免内部核糖体结合位点
      经优化后的全长cDNA序列克隆到表达载体，进一步经过序列验证，以确保序列的正确性。确保优化序列在E.coli 体内或体外，昆虫细胞，哺乳动物细胞体系中高效表达。

QIAgenes Expression Kits — E. coli

  • 预制蛋白表达载体，专门针对35，000个人类基因所设计
  • 合成全长、序列优化且经过验证的cDNA，cDNA免费克隆到表达载体，确保在E.coli体内体外系统高效表达蛋白
  • 整套解决方案，提供QIAgenes Expression construct E.coli, Positive Control, Anti-His Antibody, 和Ni-NTA Spin column

表达载体结构

  • 含有T7启动子，可直接在BL21（DE3）等菌株或利用无细胞系统进行表达
  • N端带有6×His标签，在Ni-NTA上进行一步亲和纯化, 利用TAGZyme™ 可去除6×His标签
  • 可表达无标签蛋白，利用Nde I酶切，再连接去除His标签
  • C端内置琥珀终止密码子，可利用EasyXpress Site-Specific Biotin Kit进行生物素标记
  • 卡那霉素抗性用于筛选

图1 QIAgenes expression vector – E.coli

QIAgenes表达载体有效提高蛋白表达量

      对表1中100种DNA序列优化前后的表达结果进行比较，结果表明，使用QIAgenes大于 90% 的蛋白被成功表达(膜蛋白占60%) ，产量比未经优化序列提高50倍。且无论在E. coli 体内，体外系统中均能得到最优表达(图2):

表1 DNA序列优化实验
图2 未优化序列与QIAgenes优化序列表达水平比较。 利用EasyXpress体外表达系统进行蛋白表达，Ni-NTA纯化后，利用Penta™His抗体检测表达水平


利用Ni-NTA纯化QIAgenes载体表达的蛋白
      QIAgenes表达载体N端带有His标签，可以利用Ni-NTA一步纯化得到高纯度蛋白。如果实验需要得到无标签蛋白，His标签可以利用TAGZyme system去除（图3）。

图3 利用TAGZyme高效去除His标签。
 His-tagged TNFα 利用Ni-NTA纯化后，与DAPase孵育30分钟，M: 分子量标准 CL: 细胞裂解物 FT: 流出组分 W: 洗涤组分 E: 洗脱组分

QIAgenes Expression Kits — Insect / Mammalia

  • 预制蛋白表达载体，专门针对35，000个人类基因所设计
  • 合成全长、序列优化且经过验证的cDNA，cDNA免费克隆到表达载体
  • 带有三种启动子，可在哺乳动物细胞，昆虫细胞和真核体外表达系统中高效表达蛋白
  • 整套解决方案，提供QIAgenes Expression construct Insect/Mammalian, Positive Control, Anti-His Antibody, 和Ni-NTA Mag-Beads

表达载体结构

  • 带有三种启动子，可在哺乳动物细胞，昆虫细胞和真核体外表达系统中高效表达蛋白
  • C端带有10x His标签，不干扰N端信号序列，同时可获得更好的纯化效果
  • 内置siRNA target site，可进行表达沉默（RNAi）研究
  • 可用于RNAi恢复（rescue）实验，对siRNA效果进行验证
图4 QIAgenes expression vector – Insect / Mammalia

QIAgenes表达载体有效提高蛋白表达量

图5 QIAgenes优化序列有效提高表达水平。
The optimized QIAgenes (Q) and wild-type (WT) coding sequences of the indicated proteins were cloned into QIAgene Expression Constructs and expressed in vitro (IVT) or in HEK293 cells (HEK293).

QIAgenes 表达载体订购

      订购 QIAgenes Expression Kit可以直接获得优化和预制好的表达载体，省去了传统流程中的文库筛选，PCR扩增，亚克隆，克隆筛选，测序等繁琐步骤（见以下流程图）。
      QIAgenes Expression Kit 的订购请点击www.qiagen.com/GeneGlobe/Default.aspx， 选择所需基因，即可查询预制载体详情。 QIAgenes Expression Kit价格根据基因片段长度而有所不同。详情请咨询QIAGEN China 销售员或指定代理商！


订购信息：

产品

规格

货号

QIAgenes Expression Kit — E. coli

QIAgenes Expression Construct E. coli, positive control, Penta·His Antibody, 4 Ni-NTA Spin Columns

Varies

QIAgenes Expression Kit — Insect / Mammalia

QIAgenes Expression Construct Insect/Mammalia, QIAgenes Insect/Mammalia Positive Control, Penta•His Antibody, BSA-free, Ni-NTA Magnetic Agarose Beads

Varies

EasyXpress Protein Synthesis Kit (5)

For 5 x 50 μl reactions: E. coli extract, buffers and reagents

32501

EasyXpress Insect Kit II (5)

For 5 x 50 μl reactions:Spodoptera frugiperda insect cell extract, buffers and reagents

32561
 


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