WTAP 介导 LncRNA LINC00200 的 m6A 修饰促进胶质瘤发生：潜在诊疗靶点的新发现

为探究 Wilms’ tumor 1 - associating protein（WTAP）介导的长链非编码 RNA（lncRNA）LINC00200 的 N6- 甲基腺苷（m6A）修饰在胶质瘤中的作用机制，研究人员开展相关研究。结果发现其可加速胶质瘤发生，该成果为胶质瘤诊疗提供新方向。

　　在人体复杂的生命活动中，大脑无疑是最为神秘且关键的器官之一。然而，胶质瘤这一恶性肿瘤却如同隐藏在大脑中的 “定时炸弹”，严重威胁着人们的生命健康。胶质瘤是中枢神经系统（CNS）中最常见的恶性肿瘤，约占恶性原发性脑肿瘤的 80%。根据肿瘤的生长程度和速率，它被分为 4 个等级，其中 IV 级胶质瘤恶性程度极高，患者的中位生存期通常不到 1.3 年，且预后情况差，复发率居高不下。长久以来，医学专家们一直致力于探寻胶质瘤发展和恶化的潜在分子机制，期望能找到有效的诊断和治疗靶点，从而提高患者的生存率和生活质量。

在这样的背景下，武汉第四医院的研究人员开展了一项关于胶质瘤的研究，相关成果发表在《Cell Division》杂志上。他们聚焦于长链非编码 RNA（lncRNA）LINC00200 以及 Wilms’ tumor 1 - associating protein（WTAP）介导的 m⁶A 修饰，深入探究其在胶质瘤发生发展过程中的作用机制。最终发现，WTAP 介导的 LINC00200 的 m⁶A 修饰能够通过调节 Wnt/β - catenin 通路，加速胶质瘤的发生，这一成果为胶质瘤的诊疗开辟了新的方向，具有重要的意义。

研究人员为开展此项研究，运用了多种关键技术方法。在样本获取方面，收集了 28 对胶质瘤及相邻非肿瘤组织样本。实验技术上，采用 qRT - PCR 技术检测相关基因的表达水平；通过甲基化 RNA 免疫沉淀 qPCR（MeRIP - qPCR）测定 LINC00200 的 m⁶A 修饰水平；运用 CCK8、集落形成实验检测细胞增殖能力，Transwell 实验评估细胞迁移和侵袭能力；还进行了体内实验，将转染后的细胞注入小鼠体内观察肿瘤生长情况。

下面来看具体的研究结果：

• LINC00200 mRNA 在胶质瘤样本中显著高表达：研究人员首先对各类癌症肿瘤组织和正常组织中 LINC00200 的表达差异进行分析。通过对 TCGA 数据库的数据分析，发现 LINC00200 在胶质瘤样本中呈上调状态。进一步对收集的胶质瘤组织样本进行 qRT - PCR 检测，结果显示其表达水平明显高于健康组织。而且，在 III - IV 级肿瘤组织中，LINC00200 的表达水平显著高于 I - II 级肿瘤组织。这一系列结果表明，LINC00200 在胶质瘤样本中高表达，并且其高表达与胶质瘤的高分级相关。
• 沉默 LINC00200 可降低胶质瘤细胞的恶性特性：为了探究 LINC00200 在胶质瘤中的具体作用，研究人员利用 siRNA 转染技术，在 HS683 和 T98G 细胞中沉默 LINC00200 的表达。CCK - 8 实验表明，沉默 LINC00200 后，胶质瘤细胞的增殖能力明显受到抑制。集落形成实验也显示，细胞形成的集落数量显著减少。Transwell 迁移和侵袭实验结果表明，沉默 LINC00200 后，细胞的迁移和侵袭能力大幅降低。在体内实验中，将沉默 LINC00200 的细胞注入小鼠体内，发现肿瘤的体积、大小和重量均明显减小，这充分说明沉默 LINC00200 不仅能在体外抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移，还能在体内抑制肿瘤的生长。
• 沉默 LINC00200 抑制胶质瘤细胞中 Wnt/β - catenin 通路的激活：研究人员借助 miRDB 数据库预测出 77 个与 LINC00200 结合的 miRNA，再通过 FunRich 软件对这些 miRNA 参与的关键生物学通路进行富集分析，发现 Wnt 信号通路在肿瘤进展中起着关键作用。随后，通过蛋白质免疫印迹（western blotting）检测 Wnt/β - catenin 通路中 β - catenin、c - myc 和 cyclin - D1 这三种蛋白的表达水平，结果显示在沉默 LINC00200 的细胞系中，这些蛋白的表达水平明显低于对照组，这表明沉默 LINC00200 能够抑制胶质瘤细胞中 Wnt/β - catenin 通路的激活。
• WTAP 在胶质瘤细胞中显著上调并介导 LINC00200 的 m⁶A 修饰：研究人员对多种 m⁶A 甲基转移酶进行研究，发现只有过表达 WTAP 能显著提高胶质瘤细胞中 LINC00200 的表达。通过对 TCGA 数据库和收集的胶质瘤组织样本分析，发现 WTAP 在胶质瘤中呈上调状态，且与 LINC00200 的表达呈正相关。进一步实验表明，沉默或过表达 WTAP，会相应地降低或提高 LINC00200 的表达。通过抗 m⁶A RIP 实验结合 RT - qPCR 检测发现，过表达 WTAP 可使 LINC00200 的 m⁶A 修饰水平显著增加，而沉默 WTAP 则会使其 m⁶A 修饰水平显著降低，这一系列结果充分说明 WTAP 能够调节胶质瘤细胞中 LINC00200 的 m⁶A 修饰。
• 沉默 LINC00200 部分逆转 WTAP 过表达对胶质瘤细胞的促肿瘤作用：研究人员进行了体外挽救实验，结果发现过表达 WTAP 能显著增强胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力，而在细胞中引入 si - lnc 沉默 LINC00200 后，这些能力得到部分逆转。这表明 LINC00200 通过 WTAP 介导的 m⁶A 修饰促进胶质瘤的进展，揭示了 LINC00200 与 WTAP 之间存在靶向相互作用。

综合研究结论和讨论部分，该研究首次证实了 LINC00200 在胶质瘤中呈上调状态，并且是一个促进肿瘤发生发展的关键分子。同时，明确了 WTAP 介导 LINC00200 的 m⁶A 修饰，二者共同促进胶质瘤的进展，其作用机制与 Wnt/β - catenin 通路密切相关。这一研究成果为胶质瘤的诊断和治疗提供了新的潜在生物标志物和治疗靶点，丰富了人们对胶质瘤发病机制的认识，为后续开发更有效的治疗策略奠定了坚实的理论基础，对推动胶质瘤的临床诊疗发展具有重要意义。