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胃癌（GC）预后不佳，其进展机制不明。山东第一医科大学附属第一医院等研究人员探究 RNF128 在 GC 中的作用。发现 RNF128 通过泛素化 Beclin1 抑制自噬依赖性铁死亡，促进 GC 进展。为 GC 分子治疗提供新策略。
在医学领域，胃癌如同一个顽固的 “恶魔”，严重威胁着人类健康。胃癌是一种广泛分布的恶性胃肠道肿瘤，在东亚地区尤其是中国极为常见。尽管随着医疗技术的进步，胃癌患者的预后有所改善，但它的复发和转移率依旧居高不下，而且其发病的根本原因尚未完全明晰。这就好比在黑暗中摸索前行，找不到准确的方向，使得治疗胃癌变得困难重重。
为了攻克这个难题，山东第一医科大学附属第一医院、淄博市中心医院等机构的研究人员展开了深入研究。他们将目光聚焦在 RNF128 这个神秘的蛋白身上，试图揭开它在胃癌发展过程中的神秘面纱。研究结果令人瞩目，他们发现 RNF128 作为一种 E3 泛素连接酶，能够通过对 Beclin1 进行泛素化修饰，抑制自噬依赖性铁死亡（一种依赖自噬诱导的调节性细胞死亡方式，可抑制肿瘤进展 ），进而促进胃癌的发展。这一发现为理解胃癌的发病机制提供了新的视角，也为开发针对胃癌的分子治疗新策略带来了希望，相关成果发表在《Cell Death Discovery》上。
研究人员在开展这项研究时，运用了多种关键技术方法。他们收集了 50 例原发性胃癌患者的临床样本，为研究提供了重要的素材。在细胞实验方面，进行了细胞计数试剂盒 - 8（CCK - 8）和集落形成实验，以检测细胞活力和增殖能力；还运用了定量实时荧光 PCR 分析（Q - PCR）和蛋白质免疫印迹（Western blot）技术，来检测相关基因和蛋白的表达水平。在动物实验中，构建了皮下移植瘤模型，观察肿瘤的生长情况 。
下面来具体看看研究结果：
- RNF128 在 GC 细胞中显著上调：通过对 TCGA 公共数据库分析、Q - PCR 和免疫组化实验，研究人员发现 RNF128 在胃癌细胞中的表达明显高于正常组织。在多种胃癌细胞系（如 AGS 和 HGC - 27）中，RNF128 的 mRNA 和蛋白水平均显著高于胃上皮细胞系 GES - 1。
- RNF128 促进 GC 细胞增殖：研究人员构建了 RNF128 敲低和过表达的细胞模型。CCK - 8 和集落形成实验表明，敲低 RNF128 显著抑制了胃癌细胞的活力和增殖，而过表达 RNF128 则促进了细胞的活力和增殖。但 Transwell 实验和细胞划痕实验显示，RNF128 对胃癌细胞的迁移能力没有明显影响。
- 敲低 RNF128 促进 GC 细胞中自噬依赖性铁死亡：使用不同的细胞死亡特异性抑制剂处理细胞后发现，敲低 RNF128 诱导的细胞死亡可被自噬抑制剂氯喹（CQ）和铁死亡抑制剂 Lipoxatin - 1（Lip - 1）逆转，这表明细胞死亡可能与自噬或铁死亡有关。进一步研究发现，敲低 RNF128 后，细胞中自噬相关蛋白（如 Beclin1、ATG5 和 LC3B II/I）比例增加，Sequestosome - 1（p62）减少；同时，细胞内脂质过氧化物（如 MDA 和 4 - HNE）生成增加，谷胱甘肽（GSH）减少。添加自噬抑制剂 CQ 后，自噬和铁死亡相关指标发生逆转，说明铁死亡依赖于自噬 。
- RNF128 通过 PA 结构域与 Beclin1 相互作用：通过液相色谱 - 质谱（LC - MS）/ MS 实验筛选出 RNF128 的潜在分子靶点 Beclin1，并通过内源性和外源性共免疫沉淀（Co - IP）实验以及免疫荧光实验进行验证。构建 RNF128 的截断突变体实验表明，RNF128 通过 PA 结构域与 Beclin1 相互作用 。
- RNF128 通过泛素化降解 Beclin1：研究发现，RNF128 敲低和过表达不影响 Beclin1 的 mRNA 水平，但显著影响其蛋白水平。用蛋白酶体抑制剂 MG132 处理细胞后，敲低 RNF128 导致的 Beclin1 蛋白水平升高被逆转；在 RNF128 过表达的细胞中，添加环己酰亚胺（CHX）阻断蛋白质从头合成后，Beclin1 蛋白水平显著下降，且 RNF128 过表达显著增加了 Beclin1 的泛素化水平，这表明 RNF128 通过泛素 - 蛋白酶体途径抑制 Beclin1 蛋白的稳定性 。
- RNF128 敲低通过增强 Beclin1 稳定性诱导自噬依赖性铁死亡，抑制 System Xc?活性：敲低 RNF128 促进了自噬和铁死亡，抑制了胃癌细胞的增殖和迁移，而同时敲低 Beclin1 则逆转了这些现象，说明 RNF128 敲低通过激活 Beclin1/SLC7A11/GPX4 轴，激活自噬依赖性铁死亡，最终抑制胃癌进展 。
- 敲低 RNF128 显著抑制裸鼠异种移植瘤的生长：通过裸鼠皮下成瘤实验发现，敲低 RNF128 的实验组肿瘤生长速率明显低于对照组，肿瘤体积和重量也显著减小。免疫组化染色显示，RNF128 敲低组中 Beclin1 和 ATG5 表达水平显著升高，GPX4 和 Ki67 表达水平显著降低。临床样本相关性分析表明，RNF128 与 Beclin1 呈负相关 。
在研究结论和讨论部分，此次研究首次证实了 RNF128 在胃癌组织和细胞系中的高表达，揭示了其通过泛素化 Beclin1 抑制自噬依赖性铁死亡，进而促进胃癌进展的分子机制。不过，该研究也存在一定局限性，如未充分验证 RNF128 对患者生存的影响以及与年龄、性别等因素的关系。但这并不影响研究结果的准确性和重要性，它为深入理解胃癌的发病机制提供了关键线索，也为胃癌的诊断和治疗开辟了新的方向，有望在未来帮助医生更好地对抗胃癌这一顽疾，拯救更多患者的生命。
