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为解决高危神经母细胞瘤预后差的问题，研究人员开展了针对 WIP1 和 H3K27 去甲基化酶的药物联合研究。结果发现 WIP1 抑制剂 SL-176 与 GSK-J4 联合可协同抑制肿瘤生长，这为神经母细胞瘤的精准治疗提供了新方向。
在儿童肿瘤领域，神经母细胞瘤是一种常见且棘手的疾病，尤其是高危神经母细胞瘤，其生存率仅 50 - 60%，复发儿童的预后更差。传统化疗效果有限，开发针对性的精准治疗迫在眉睫。位于染色体 17q23.2 的 PPM1D 基因编码的磷酸酶 WIP1（野生型 p53 诱导的磷酸酶 1），在神经母细胞瘤中常常过表达，与不良预后相关，是潜在的治疗靶点。同时，组蛋白 H3K27 去甲基化酶 JMJD3 在神经母细胞瘤中也高度表达。基于此，来自瑞典卡罗林斯卡学院（Karolinska Institutet）的研究人员开展了一项重要研究，旨在探究针对 WIP1 和 JMJD3 的联合抑制策略对神经母细胞瘤的治疗效果，该研究成果发表在《Cell Death and Disease》杂志上。
研究人员主要运用了以下关键技术方法：一是药物组合筛选技术，将 WIP1 抑制剂 SL-176 和 GSK2830371 分别与 527 种化合物联合，筛选具有协同效应的组合；二是细胞实验技术，包括细胞活力检测、细胞增殖实验、免疫印迹、定量 PCR（qPCR）等，用于评估药物对细胞的影响；三是 RNA 测序技术（RNA-seq），分析联合治疗对转录组的影响；四是斑马鱼异种移植实验，在体内验证联合治疗的效果。
研究结果
- 药物组合筛选：在 p53 野生型的 IMR-32 细胞和 p53 突变的 SK-N-AS 细胞中进行药物组合筛选，发现 GSK-J4 与 SL-176 联合时，在 IMR-32 细胞中 ΔDSS（药物敏感性差异评分）高达 18.9，在 SK-N-AS 细胞中 ΔDSS 为 5.7，表明二者具有协同作用。
- 细胞活力和增殖实验：在多种神经母细胞瘤细胞系中，无论 TP53 突变状态、PPM1D 表达或 MYCN 扩增状态如何，SL-176 和 GSK-J4 联合治疗均显示出协同抑制细胞活力和增殖的效果。与单独用药相比，联合用药能显著降低细胞活力，且在高剂量下对正常人类真皮成纤维细胞（nHDF）也有协同细胞毒性。
- 长期和三维细胞培养实验：在长期实验中，联合治疗对神经母细胞瘤细胞生长的抑制作用可持续 6 天，药物去除后部分细胞虽有再生但效果仍显著。在三维肿瘤球模型中，联合治疗显著影响肿瘤球大小和细胞膜完整性，增加细胞凋亡相关蛋白（如 cleaved caspase-3）和 WIP1 抑制标记物（p21）的表达。
- 联合治疗机制研究：免疫印迹和 qPCR 分析表明，联合治疗可诱导神经母细胞瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞。处理 48 - 72 小时后，WIP1 下游靶点（p38、Chk2、p53）磷酸化增加，总 p53 和 p21 上调，凋亡标记物 PARP 和 PUMA 也受影响。RNA-seq 结果显示，联合治疗导致大量基因差异表达，主要富集在 DNA 损伤反应、p53 通路等相关通路。
- 斑马鱼异种移植实验：将表达绿色荧光蛋白（GFP）的 SK-N-BE (2) 细胞移植到斑马鱼胚胎中，经 SL-176 和 GSK-J4 联合治疗后，斑马鱼体内肿瘤生长显著降低，而单独治疗组与对照组相比无明显变化。
研究结论与讨论
该研究证实了 WIP1 抑制剂 SL-176 和 H3K27 去甲基化酶抑制剂 GSK-J4 联合治疗神经母细胞瘤具有显著的协同效应。联合治疗通过诱导细胞周期阻滞和凋亡，抑制肿瘤生长。虽然目前相关抑制剂因药代动力学性质不足尚未进入临床开发，但研究结果为神经母细胞瘤的治疗提供了新的方向和理论依据，WIP1 和 JMJD3 有望成为未来临床治疗神经母细胞瘤的重要靶点，尤其是二者联合治疗的策略值得进一步深入研究和探索。
