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胆管癌（CCA）治疗棘手，现有疗法效果有限。研究人员开展针对整合素 αvβ6的第五代嵌合抗原受体 T 细胞（CAR T）研究，其能分泌抗 PD-L1 单链可变片段（scFv）。结果显示该细胞体外活性优、浸润性好，为 CCA 免疫治疗带来新希望。
胆管癌，这个隐匿在人体胆管系统中的 “杀手”，近年来愈发猖獗，全球发病率呈上升趋势，尤其是在泰国东北部地区，更是成为当地居民健康的重大威胁。胆管癌预后极差，手术切除作为唯一可能治愈的方法，却仅适用于约 20% 的患者，大多数患者只能无奈地面对无法切除的肿瘤。传统的化疗方案，如吉西他滨联合顺铂，也只能为患者带来约 12 个月的中位总生存期。尽管免疫检查点抑制剂的加入带来了一些希望，但有效的治疗手段依旧捉襟见肘。
在此背景下，嵌合抗原受体 T 细胞（CAR T）疗法走进了人们的视野。这种疗法在血液系统恶性肿瘤治疗中成绩斐然，可一旦应用于实体瘤，就遭遇了重重困境。其中，肿瘤微环境的免疫抑制作用以及肿瘤的异质性是两大 “拦路虎”，而肿瘤细胞高表达的程序性死亡配体 1（PD-L1），更是让 CAR T 细胞难以施展拳脚，导致治疗效果大打折扣。
为了突破这些难题，来自泰国玛希隆大学（Mahidol University）的研究人员开启了一场意义非凡的探索之旅。他们致力于研发一种新型的 CAR T 细胞疗法，期望能为胆管癌患者带来新的生机。经过不懈努力，研究人员成功开发出第五代 CAR T 细胞（A20 CAR5 T 细胞），它不仅能够精准靶向整合素 αvβ6，还能分泌抗 PD-L1 单链可变片段（scFv），就像给 CAR T 细胞装上了 “双重武器”，同时对肿瘤细胞和 PD-1/PD-L1 通路发起攻击。
研究人员在此次研究中运用了多种关键技术方法。细胞培养技术用于培养患者来源的胆管癌细胞系和人胚肾细胞；通过流式细胞术评估细胞表面蛋白表达、CAR T 细胞转导效率等；构建慢病毒载体并用于 CAR T 细胞的生成；利用 3D 肿瘤球体模型评估 CAR T 细胞的细胞毒性和浸润能力。
在研究结果方面，研究人员首先对胆管癌细胞系中整合素 αvβ6和 PD-L1 的表达进行了分析。通过免疫荧光、免疫印迹和流式细胞术等实验，发现不同细胞系中这两种蛋白的表达水平存在差异，且在部分细胞系中存在共定位现象。
接着是 A20 CAR4 T 和 A20 CAR5 T 细胞的生成及特性研究。利用慢病毒转导技术成功制备了这两种细胞，并且通过实验证实 A20 CAR5 T 细胞能够分泌抗 PD-L1 scFv，且该 scFv 能有效结合到效应细胞和靶细胞的 PD-L1 上。
在抗肿瘤效果研究中，经过延长抗原刺激和肿瘤再挑战实验，发现 A20 CAR5 T 细胞在长期共培养实验中展现出比 A20 CAR4 T 细胞和非转导 T 细胞（NT）更强的细胞毒性，即便在低效应细胞与靶细胞比例下，其分泌的抗 PD-L1 scFv 也能增强细胞毒性。
在对 A20 CAR T 细胞的特性研究中，CFSE 增殖实验表明 A20 CAR4 T 和 A20 CAR5 T 细胞的增殖能力均强于 NT T 细胞。同时，对 T 细胞耗竭标记物的分析显示，A20 CAR5 T 细胞的 PD-L1 检测水平显著降低。细胞因子分泌实验发现，A20 CAR4 T 和 A20 CAR5 T 细胞与靶细胞共培养后，IFN-γ 等细胞因子的分泌量显著增加，且 A20 CAR5 T 细胞还能分泌更多的颗粒酶 A 和 sFasL。
最后，在 3D 球体培养实验中，A20 CAR5 T 细胞在消除和浸润表达整合素 αvβ6和 PD-L1 的胆管癌细胞方面表现出色，对高表达 PD-L1 的肿瘤球体具有更强的细胞毒性和更深的浸润能力。
研究结论和讨论部分指出，该研究证明了联合靶向整合素 αvβ6的 CAR T 细胞疗法与 PD-L1 阻断，可增强对胆管癌的抗肿瘤活性。A20 CAR5 T 细胞相比传统的 A20 CAR4 T 细胞，在肿瘤细胞毒性和功能上有显著提升。这一研究为胆管癌免疫治疗策略的发展带来了新的曙光，有助于克服免疫治疗抵抗，改善患者的预后。然而，研究也存在一些局限性，如未对患者来源样本中相关蛋白的表达进行研究，缺乏临床相关性，且研究结果基于体外模型，需要在体内模型中进一步验证。未来，还需深入探索联合治疗的协同机制，评估 A20 CAR5 T 细胞与其他治疗方式联合使用的效果，并开展临床试验，将这些研究成果真正应用到临床实践中，为胆管癌患者带来实实在在的益处。
