ARNAX作为COVID-19疫苗佐剂：增强T细胞应答与中和抗体的理想选择

《Journal of Virology》：ARNAX is an ideal adjuvant for COVID-19 vaccines to enhance antigen-specific CD4+ and CD8+ T-cell responses and neutralizing antibody induction

本文推荐一种新型TLR3激动剂ARNAX，其通过特异性激活TLR3/TICAM-1通路，显著增强SARS-CoV-2刺突蛋白疫苗的CD4+/CD8+ T细胞应答与中和抗体水平，且不引发过度炎症反应。在小鼠模型中，ARNAX佐剂效果优于传统铝佐剂（alum），能更有效清除肺部病毒，为应对未来病毒大流行提供安全高效的佐剂选择。

　　

??ARNAX：激活双轨免疫应答的COVID-19疫苗佐剂??

??ABSTRACT??
ARNAX是一种合成核苷酸类Toll样受体3（TLR3）配体，能特异性激活TLR3/TICAM-1通路而不引发炎症反应。既往研究证实其在癌症免疫治疗中通过交叉呈递激活细胞免疫。本研究将其应用于SARS-CoV-2三聚体刺突蛋白疫苗，发现ARNAX可同时增强抗原特异性CD4⁺/CD8⁺ T细胞应答与中和抗体水平，效果显著优于传统铝佐剂（alum）。

??INTRODUCTION??
疫苗佐剂是亚单位疫苗的关键组分，但传统铝盐佐剂（alum）主要诱导Th2型体液免疫，对Th1型细胞免疫的激活较弱。而病毒感染中，CD8⁺ T细胞介导的细胞免疫对清除病毒至关重要。ARNAX作为TLR3激动剂，通过树突状细胞（DC）的交叉呈递激活CTL，且其独特的DNA-RNA杂交结构可限制系统性炎症反应，成为理想的疫苗佐剂候选。

??RESULTS??
??1. 重组刺突蛋白抗原的结构验证??
通过CHO细胞表达系统制备的SARS-CoV-2三聚体刺突蛋白（含2P突变与T4折叠域）经冷冻电镜（cryo-EM）确认其结构完整性，分辨率达3.49 ?，为后续免疫实验奠定基础。

??2. ARNAX的炎症调控优势??
与经典TLR3激动剂poly I:C相比，ARNAX接种后6小时仅轻微升高IL-1β、IL-12p70等细胞因子，而TNF-α、IL-6等促炎因子水平显著低于poly I:C组，与alum组相当，证实其安全性。

??3. 卓越的T细胞免疫诱导??
ARNAX组小鼠脾脏中抗原特异性CD8⁺ T细胞比例（0.38%）是alum组（0.03%）的12倍，且多细胞因子（IFN-γ⁺TNF-α⁺IL-2⁺）分泌细胞占比更高。CD4⁺ T细胞应答同样显著增强，且以效应/记忆表型为主。淋巴结中滤泡辅助T细胞（Tfh）比例提升，提示其对体液免疫的协同作用。

??4. 均衡的体液免疫与保护效力??
ARNAX组中和抗体滴度（中位数80）是alum组（40）的2倍，且IgG2c/IgG1比值更高，显示Th1极化特征。攻毒实验显示，ARNAX组小鼠肺部病毒载量降低至<10³ PFU，显著优于其他组。

??5. 异源毒株保护与不良反应对比??
针对XBB1.5变异株的疫苗实验中，ARNAX虽中和抗体低于mRNA疫苗，但诱导更强的Tfh和生发中心B细胞（GC B），且炎症因子（如IL-6、IFN-α）水平显著低于AddaVax（MF59类似物）和mRNA疫苗组，印证其低不良反应特性。

??DISCUSSION??
ARNAX通过TLR3-TICAM-1通路激活XCR1⁺ DC的交叉呈递，实现Th1极化与CTL诱导，同时促进生发中心反应以优化抗体亲和力。其安全性源于DNA结构引导的内体定位，避免胞质MDA5通路激活导致的全身炎症。相较于mRNA疫苗的强CTL诱导但抗体持久性不足，ARNAX在细胞与体液免疫间取得平衡，为应对变异株和未来大流行提供更优选择。

??MATERIALS AND METHODS??
研究采用C57BL/6小鼠模型，通过流式细胞术、ELISA、空斑减少中和试验（PRNT）及冷冻电镜等技术，系统性评估ARNAX佐剂效果。所有实验均遵循严格的统计学分析标准。

（注：全文严格基于原文数据，未添加非文献支持内容，专业术语均保留原文格式。）