BIRC2 阻断：肝癌免疫治疗的新突破 —— 打破免疫逃逸枷锁，开启抗癌新征程

《Molecular Cancer》：BIRC2 blockade facilitates immunotherapy of hepatocellular carcinoma

为解决肝癌免疫治疗效果有限且机制不明的问题，研究人员开展了以 BIRC2 为关键靶点的研究。结果发现 BIRC2 高表达与肝癌患者不良预后及免疫治疗耐药相关，阻断 BIRC2 可促进免疫治疗。这为肝癌免疫治疗提供了新策略。

　　肝癌，作为全球范围内癌症相关死亡的重要 “元凶”，约占据所有原发性肝肿瘤的 90% 。在过去十年，多激酶抑制剂一直是肝癌的主要治疗手段，但耐药性和持久毒性问题却如影随形，令人头疼不已。与此同时，众多其他药物在各类 3 期临床试验中也纷纷折戟沉沙，未能达到预期的临床终点。

免疫治疗的出现，尤其是免疫检查点阻断（ICB）疗法，如抗程序性死亡蛋白 1（PD-1）、抗程序性死亡配体 1（PD-L1）和抗细胞毒性 T 淋巴细胞抗原 4（CTLA-4）疗法，为众多恶性肿瘤的治疗带来了新的希望，也为肝癌治疗开辟了新的路径。然而，单药抗 PD-1 抗体在肝癌治疗中的表现却不尽如人意，在 3 期研究中，其延长患者生存期的效果有限，缓解率仅约 15%。即便采用联合治疗策略，如抗 PD-1 联合抗血管内皮生长因子（VEGF）疗法，整体缓解率依然受限，高达 70% 的患者会出现耐药现象。因此，深入探究肝癌免疫治疗耐药的内在机制，并寻找更有效的联合治疗策略迫在眉睫。

中山大学肿瘤防治中心的研究人员肩负重任，开展了一项意义重大的研究。他们发现杆状病毒 IAP 重复含蛋白 2（BIRC2）在肝癌免疫逃逸中扮演着关键角色，通过一系列实验，揭示了 BIRC2 的作用机制，还发现阻断 BIRC2 能够显著促进肝癌的免疫治疗。这一研究成果发表在《Molecular Cancer》上，为肝癌免疫治疗提供了全新的方向和潜在的治疗靶点，有望打破肝癌治疗的困境，给众多患者带来新的生机。

研究人员采用了多种关键技术方法来开展此项研究。首先运用全基因组 CRISPR/Cas9 筛选技术，在肿瘤细胞 / T 细胞共培养模型中筛选与免疫逃逸相关的基因；通过 RNA 测序（RNA-seq）分析 BIRC2 相关的信号通路；利用共免疫沉淀（co-IP）技术鉴定 BIRC2 的相互作用蛋白；借助免疫组化（IHC）分析 BIRC2 在肝癌组织中的表达及与临床病理特征的关系；还构建了多种原位和异种移植肝癌模型，用于评估 BIRC2 抑制剂的治疗效果 。

研究结果如下：

• BIRC2 是肿瘤内在的免疫逃逸基因：通过全基因组 CRISPR/Cas9 筛选，研究人员发现 BIRC2 在肝癌免疫逃逸中排名靠前。敲除 BIRC2 后，在体外与肿瘤特异性 OT-I T 细胞共培养时，肝癌细胞凋亡增加、克隆形成减少；在体内，免疫缺陷的 NSG 小鼠皮下肿瘤生长不受影响，但免疫健全的 C57BL/6J 小鼠肿瘤形成延迟，且肿瘤中 CD8⁺和 CD4⁺ T 细胞浸润增多 。
• BIRC2 与肝癌患者生存及免疫治疗耐药相关：研究发现，肝癌组织中 BIRC2 蛋白和 mRNA 表达均高于癌旁组织。在 765 例肝癌患者队列中，高表达 BIRC2 与较短的总生存期（OS）和无病生存期（DFS）相关；在接受联合免疫治疗的患者中，高表达 BIRC2 与更差的 OS 相关；在另一 47 例接受抗 PD-1 联合乐伐替尼治疗的乙肝相关肝癌患者队列中，高表达 BIRC2 与较差的无进展生存期（PFS）相关 。
• BIRC2 调节肝癌细胞的 IFNγ 反应：RNA-seq 分析表明，BIRC2 主要影响 IFNγ 反应相关的生物学过程。敲低 BIRC2 可增强 IFNγ 诱导的肝癌细胞生长抑制和凋亡，上调主要组织相容性复合体 I 类（MHC-I，人类中为 HLA-ABC，小鼠中为 H2Kb）和 PD-L1 的表达，促进肿瘤抗原呈递 。
• BIRC2 使肝癌细胞中的非经典 NFκB 通路失活：研究发现，BIRC2 敲低不影响 JAK/STAT/IRF 通路，但可加速非经典 NFκB 通路的激活，促进 NFκB p52 的核积累 。
• BIRC2 与 NIK 相互作用并介导其泛素化降解：通过 co-IP 和质谱分析，证实 BIRC2 与 NFκB 诱导激酶（NIK，非经典 NFκB 通路的关键上游激酶）直接相互作用，并促进 NIK 的泛素化降解。抑制 NIK 可逆转 BIRC2 对 HLA-ABC 和 PD-L1 表达的抑制作用 。
• TNFα 通过 NFκB p65 转录诱导 BIRC2 表达：研究表明，TNFα 可显著提高 BIRC2 在 mRNA 和蛋白水平的表达，且 BIRC2 启动子的转录活性依赖于 NFκB p65 的结合位点 。
• BIRC2 阻断抑制原位肝癌模型中的肿瘤生长：研究人员选用 LCL161（一种 BIRC2 抑制剂）进行实验，发现在 DEN/CCl₄和 c-Myc 肝癌模型中，LCL161 均能显著抑制肿瘤生长，增加淋巴细胞浸润，减少肿瘤组织中 BIRC2 蛋白水平 。
• BIRC2 阻断促进 T 细胞的抗肿瘤功能：LCL161 处理 T 细胞后，可增强其功能，促进效应细胞因子 IFNγ 和 TNFα 的产生，激活非经典 NFκB 通路。在体内，LCL161 处理可使肿瘤浸润淋巴细胞中的 CD8⁺和 CD4⁺ T 细胞呈现效应表型 。
• BIRC2 阻断增强抗 PD-1 治疗的疗效：在 Hepa1-6-OVA 肿瘤小鼠模型中，LCL161 联合抗 PD-1 抗体治疗的效果最佳，可显著抑制肿瘤生长，延长小鼠生存期，增强肿瘤特异性 OT-I T 细胞产生的抗肿瘤细胞因子水平，协同促进肿瘤细胞凋亡 。
• NIK 和 HLA-ABC 表达与肝癌患者良好生存相关：在肝癌组织微阵列中，高表达 NIK 和 HLA-ABC 与肝癌患者较好的 OS、DFS 和 PFS 相关，且二者与 BIRC2 的表达呈负相关 。

研究结论和讨论部分指出，BIRC2 通过泛素化依赖的 NIK 降解和抑制 MHC-I 表达，促进肝癌的免疫逃逸，抑制肿瘤抗原呈递。阻断 BIRC2 可同时使肿瘤细胞对免疫攻击敏感，并增强 T 细胞的抗肿瘤免疫反应，从而促进肝癌的免疫治疗。然而，该研究也存在一定局限性，如细胞和小鼠模型不能完全反映患者肿瘤微环境的复杂性，肝癌的异质性可能导致 BIRC2 阻断治疗效果存在差异，获取肿瘤组织进行活检存在困难，且研究主要集中于乙肝相关肝癌，BIRC2 阻断在非病毒病因肝癌中的疗效有待进一步探索。尽管如此，这项研究依然为肝癌免疫治疗提供了新的靶点和策略，为后续研究和临床治疗开辟了新的道路，有望推动肝癌治疗领域的进一步发展，为肝癌患者带来更多的生存希望。