LGALS3BP 抗体偶联药物联合免疫疗法抑制神经母细胞瘤生长：液体活检与精准治疗的新突破

《Journal of Translational Medicine》：LGALS3BP antibody-drug conjugate enhances tumor-infiltrating lymphocytes and synergizes with immunotherapy to restrain neuroblastoma growth

为解决神经母细胞瘤（NB）治疗难题，“G. d’Annunzio” 大学研究人员开展以 LGALS3BP 为靶点的研究。发现循环 LGALS3BP 可作液体活检生物标志物，1959-sss/DM4 ADC 联合抗 PD-1 治疗能抑制肿瘤生长，为 NB 治疗提供新策略。

　　神经母细胞瘤，作为儿童群体中最常见且极具侵袭性的颅外实体肿瘤，犹如悬在患儿及其家庭头顶的 “达摩克利斯之剑”。近半数患者存在高转移风险，5 年生存率仅约 50%。当前，其诊断依赖活检与临床症状，不仅难以实现早期干预，还面临组织学侵袭性及疾病异质性等诸多问题。现有多模式治疗方案，如手术、放化疗及免疫治疗，虽在一定程度上改善了患者预后，但长期副作用和高毒性问题突出，免疫检查点抑制剂（ICIs）的临床反应也不尽人意，这使得寻找新的治疗靶点和生物标志物迫在眉睫。

在此背景下，“G. d’Annunzio” 大学的研究人员挺身而出，开展了一系列针对神经母细胞瘤的研究。他们将目光聚焦于 LGALS3BP 蛋白，旨在探索其作为生物标志物和治疗靶点的潜力，为神经母细胞瘤的治疗开辟新路径。最终，研究成果发表于《Journal of Translational Medicine》，为这一领域带来了新的希望。

研究人员在本次研究中运用了多种关键技术方法。在细胞实验方面，通过稳定慢病毒转导构建细胞系，利用蛋白质免疫印迹（western blotting）、实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）、酶联免疫吸附测定（ELISA）等技术，对细胞内和细胞分泌的 LGALS3BP 进行检测与分析；借助免疫荧光和共聚焦成像观察细胞表面 LGALS3BP 的表达情况；运用细胞毒性实验测定药物对细胞增殖的抑制作用，用流式细胞术（FACS）分析免疫原性细胞死亡（ICD）标记物和程序性死亡配体 1（PD-L1）水平。在动物实验中，建立了人神经母细胞瘤假转移 NSG 小鼠模型和同基因 A/J 小鼠模型，通过 ELISA 检测血清和细胞外囊泡（EVs）相关的 LGALS3BP 水平，利用肿瘤浸润免疫细胞（TIIC）分析探究肿瘤微环境中的免疫细胞变化，开展体内联合治疗实验评估药物疗效，还进行了再挑战实验验证免疫记忆的存在。

下面来看具体的研究结果：

1. 循环 LGALS3BP 与神经母细胞瘤转移的关系：研究人员利用假转移小鼠模型，将高表达 LGALS3BP 的人神经母细胞瘤 SKNAS 细胞经尾静脉注射到小鼠体内。通过 ELISA 检测发现，循环中的 LGALS3BP，无论是与 EVs 结合的还是游离的，其水平都与 SKNAS 细胞诱导的肝、肺、肾转移灶数量呈正相关，且在肿瘤发生早期，即接种 SKNAS 细胞 14 天后，就能检测到其水平变化，且与转移灶数量紧密相关，而在无瘤小鼠中则检测不到。这表明循环 LGALS3BP 水平有望成为神经母细胞瘤可靠的生物标志物。
2. 构建过表达人 LGALS3BP 的小鼠神经母细胞瘤细胞模型：为研究 LGALS3BP 作为治疗靶点的潜力，研究人员通过慢病毒转导技术，构建了过表达人 LGALS3BP 的 NXS2 细胞系（NXS2 hLGALS3BP）。经 mRNA 和蛋白质分析、共聚焦显微镜观察以及 EVs 检测证实，NXS2 hLGALS3BP 细胞显著高表达 LGALS3BP，且分泌水平与高表达 LGALS3BP 的人类癌细胞系相当，为后续研究奠定了基础。
3. 细胞毒性载荷 DM4 诱导 ICD 和 PD-L1 表达：细胞杀伤实验表明，作为构建抗 LGALS3BP ADC 的细胞毒性化合物 ravtansine DM4，在纳摩尔浓度下就展现出强大的细胞毒性，其半数抑制浓度（IC₅₀）为 0.32nM，且在对照细胞和 hLGALS3BP 表达细胞中效果相同，而裸 1959 抗体则无细胞毒性。进一步研究发现，用亚致死浓度的 DM4 处理 NXS2 细胞 72 小时后，细胞表面的 ICD 标记物钙网蛋白、热休克蛋白 70（HSP70）和热休克蛋白 90（HSP90）显著上调，同时 PD-L1 表达也明显增加，这表明 DM4 可诱导 ICD，但也可能引发肿瘤耐药。
4. 抗 LGALS3BP ADC 诱导肿瘤缩小和激活 TILs 招募：在同基因小鼠模型中，给予 10mg/kg、每周两次的抗 LGALS3BP ADC（1959-sss/DM4）治疗，可使 hLGALS3BP 表达肿瘤显著缩小，延长小鼠生存期，但对对照肿瘤无效。7 天后对肿瘤浸润细胞分析发现，接受 ADC 治疗的肿瘤中，活化的肿瘤浸润 T 淋巴细胞（TILs）显著增加，尤其是 CD69⁺/CD45⁺CD3⁺细胞，以及 CD8⁺/CD69⁺颗粒酶 B⁺细胞亚群频率显著提升，这表明 ADC 治疗可增强抗肿瘤免疫反应。
5. 抗 LGALS3BP 与抗 PD-1 免疫疗法协同促进持久抗肿瘤活性：为探究联合治疗效果，研究人员开展了六臂治疗试验，将 1959-sss/DM4 与抗 PD-1 联合使用。结果显示，联合治疗组小鼠的抗肿瘤活性显著增强，生存期延长至 60 天，6 只小鼠中有 4 只在治疗 60 天后肿瘤完全消失。再挑战实验表明，治愈小鼠对肿瘤具有免疫记忆，肿瘤生长明显延迟，且对再次给予的抗 PD-1 治疗更为敏感，这表明联合治疗可诱导持久的抗肿瘤免疫反应。

研究结论与讨论部分指出，本研究首次证实循环 LGALS3BP 可作为神经母细胞瘤液体活检的有效生物标志物，为疾病监测提供了新手段。同时，1959-sss/DM4 ADC 联合抗 PD-1 免疫疗法在神经母细胞瘤治疗中展现出协同增效作用，显著抑制肿瘤生长，延长小鼠生存期，并诱导免疫记忆，为临床治疗提供了新的潜在策略。不过，ADC 临床转化仍面临诸多挑战，如耐药性问题。未来需进一步探索克服耐药性的方法，寻找能监测治疗反应和耐药机制的生物标志物，同时优化联合治疗方案，推动神经母细胞瘤治疗的发展，为患儿带来更多生存希望。