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为解决肝癌免疫治疗中部分患者疗效不佳及耐药问题，研究人员开展了 Wnt 通路抑制对肝癌细胞 PD-L1 表达影响及联合治疗潜力的研究。结果显示，Wnt 通路抑制可降低 PD-L1 表达，增强 PD-1 阻断疗效，为肝癌治疗提供新策略。
肝癌，作为一种常见且凶险的恶性肿瘤，严重威胁着人类的健康。在晚期肝癌的治疗中，尽管免疫疗法带来了新的希望，比如针对程序性死亡配体 1（PD-L1）通路的免疫治疗，已成为晚期肝细胞癌（HCC）的标准治疗方案，但并非所有患者都能从中获益。部分患者治疗效果不佳，还有些起初有效的肿瘤也会逐渐产生耐药性，这使得晚期肝癌患者在一线 PD-1 阻断疗法失败后的预后情况依旧很差。与此同时，Wnt 信号通路在肝癌中常常处于上调状态，它不仅有助于维持肿瘤起始细胞、导致耐药、促进肿瘤进展和转移，还会营造免疫抑制性的肿瘤微环境，降低免疫检查点抑制剂的有效性 。鉴于此，来自台湾大学医学院肿瘤学研究所等机构的研究人员开展了相关研究，旨在探索 Wnt 通路抑制对肝癌细胞中 PD-L1 表达的影响，以及联合 Wnt 通路抑制剂和 PD-1 阻断剂治疗肝癌的潜在价值。该研究成果发表在《Biology Direct》杂志上。
研究人员为开展此项研究，运用了多种关键技术方法。细胞实验方面，采用人肝癌细胞系 HuH7、 Hep3B 以及小鼠肝癌细胞系 BNL 1ME A.7R.1，通过 Western blot 分析、流式细胞术、定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）等技术检测相关蛋白和基因的表达。动物实验上，构建原位肿瘤模型，利用生物发光成像监测肿瘤生长，借助免疫相关基因表达谱分析肿瘤免疫状态。此外，还进行了 CTNNB1 基因的敲低和过表达实验，以及报告基因检测等。
下面来详细看看研究结果：
- Wnt 通路抑制降低 PD-L1 蛋白表达但不影响 mRNA 表达：研究人员使用 XAV939 和 IWR-1 这两种 Wnt 通路抑制剂处理 HuH7 和 Hep3B 细胞，发现它们能显著降低由干扰素 -γ（IFN-γ）诱导的 PD-L1 蛋白表达，且呈剂量依赖性，同时减少活性 β-catenin 的水平。不过，这两种抑制剂并未降低编码 PD-L1 的 CD274 基因的 mRNA 水平。通过报告基因检测证实，XAV939 和 IWR-1 可抑制 Wnt 通路活性。在 HuH7 细胞中过表达 β-catenin，能够逆转 Wnt 通路抑制剂对 PD-L1 表达的抑制作用。在 120 例肝癌患者组织样本中，也发现 Wnt 通路激活与肿瘤细胞中 PD-L1 阳性细胞比例增加相关。
- CTNNB1 敲低产生类似结果：研究人员利用 shRNAs 敲低 CTNNB1（编码 β-catenin 的基因）的表达，结果显示，在 HuH7 和 Hep3B 细胞中，CTNNB1 敲低同样降低了 IFN-γ 诱导的 PD-L1 表达，且不影响 CD274 mRNA 的表达 。
- Wnt 通路抑制通过 4E-BP1 减少 PD-L1 翻译：研究人员在 HuH7 细胞中观察到，Wnt 通路抑制后 4 小时，PD-L1 蛋白表达水平就开始下降，而 mRNA 表达保持稳定。使用环己酰亚胺阻止翻译后发现，Wnt 通路抑制剂处理组与对照组的 PD-L1 蛋白表达水平相似，表明 PD-L1 表达减少是由于翻译减少而非降解增加。进一步研究发现，Wnt 通路抑制后，未磷酸化的 4E-BP1 水平增加，它可结合真核起始因子 4E（eIF-4E），抑制其翻译起始功能，从而减少 PD-L1 的翻译。
- 体内模型测试联合抑制 Wnt 和 PD-L1 通路的效果：在小鼠原位肝癌模型中，同时使用 XAV939 和抗 PD-L1 抗体治疗的小鼠，其肝脏肿瘤明显小于单独使用 XAV939、抗 PD-L1 抗体或对照组的小鼠，且联合治疗组小鼠的生存时间最长。对肿瘤组织进行免疫相关基因表达谱分析发现，联合治疗可增强多种免疫相关通路的功能，如 T 细胞功能和先天免疫，且增加的巨噬细胞功能主要来源于 M1 巨噬细胞 。
研究结论表明，Wnt 通路抑制可通过抑制翻译降低肝癌细胞中 PD-L1 的表达，并且能够增强 PD-1 阻断的疗效。这一发现为改善肝癌免疫治疗效果开辟了新的途径。不过，该研究也存在一定局限性，比如仅研究了两种 Wnt 通路抑制方法，其他抑制剂对 PD-L1 表达的影响尚不明确；联合治疗虽延长了小鼠生存期，但仍无法避免耐药的发生。未来还需要进一步探索克服免疫治疗耐药的策略，深入研究 Wnt 通路抑制对肿瘤微环境的影响，并扩大样本量对免疫相关数据进行验证。总体而言，这项研究为肝癌的免疫治疗提供了重要的理论依据和潜在的治疗方向，有望推动肝癌治疗领域的进一步发展。
