hnRNPA2B1 调控小细胞外囊泡介导卵巢癌转移机制新探：为攻克卵巢癌带来新曙光

为探究卵巢癌（OvCa）转移机制，尤其是肿瘤来源小细胞外囊泡（sEVs）中微小 RNA（miRNAs）的分选机制，研究人员开展了关于 hnRNPA2B1 在 OvCa 转移中作用的研究。结果发现 hnRNPA2B1 可促进 OvCa 转移，该研究为 OvCa 治疗提供新策略。

　　卵巢癌，作为一种恶性的妇科肿瘤，其预后往往较差。多数患者在初次诊断时就已出现腹膜转移，这极大地限制了患者的生存希望。在肿瘤的发展过程中，小细胞外囊泡（sEVs）起着关键作用，它犹如细胞间通讯的 “信使”，在肿瘤微环境（TME）中传递各种信号 。其中，sEVs 携带的微小 RNA（miRNAs）能重塑 TME，促进肿瘤转移。然而，miRNAs 是如何精准地被分选进入肿瘤 sEVs 的，这一机制却如同迷雾一般，尚未被完全揭示。

为了拨开这层迷雾，华中科技大学同济医学院附属协和医院的研究人员勇挑重担，开展了一系列深入研究。他们将目光聚焦于 RNA 结合蛋白（RBPs），旨在找出参与 sEV-miRNA 分选的关键因子，进而揭示肿瘤转移的潜在机制，为卵巢癌的治疗开辟新的道路。

研究人员首先通过生物信息学筛选和临床相关性分析，发现 hnRNPA2B1 可能是促进卵巢癌转移的关键 RBP。随后，他们运用多种实验技术，如免疫组化（IHC）、CRISPR-Cas9 基因编辑技术、高通量 miRNA 测序、RNA 免疫沉淀（RIP）等，深入探究 hnRNPA2B1 在卵巢癌转移中的作用及机制。

在研究过程中，研究人员发现，hnRNPA2B1 在卵巢癌患者中的高表达与不良预后和大网膜转移密切相关。通过构建小鼠原位移植瘤模型，研究人员发现敲低 hnRNPA2B1 能显著抑制肿瘤转移，减少大网膜中的肌成纤维细胞信号。进一步研究表明，hnRNPA2B1 可通过识别 UAG 序列基序，将特定的 miRNAs（如 miR-21-5p、miR-29a-3p 和 miR-224-5p）分选到 sEVs 中。这些 sEV-miRNAs 能激活大网膜来源的原代成纤维细胞（ODPFs），使其转化为癌症相关肌成纤维细胞（myCAFs），进而促进肿瘤转移。

深入研究发现，hnRNPA2B1 介导的 sEV-miRNAs 通过激活 PI3K/AKT 信号通路，促使 myCAFs 活化。在体内外实验中，抑制 hnRNPA2B1 或相关 sEV-miRNAs，均可显著抑制 myCAF 活化和肿瘤转移。而补充 miR-21-5p、miR-29a-3p 和 miR-224-5p，能够部分恢复被抑制的 myCAF 活化和肿瘤转移能力。

总的来说，该研究揭示了 hnRNPA2B1 在卵巢癌转移中的重要作用。hnRNPA2B1 通过介导 miRNA 分选进入 sEVs，激活 myCAFs，进而促进卵巢癌转移 。这一发现为卵巢癌的治疗提供了新的潜在靶点，有望推动卵巢癌个性化治疗的发展。

研究人员为开展这项研究，主要运用了以下关键技术方法：一是获取 54 例卵巢癌患者的肿瘤组织、19 对原发性肿瘤及配对大网膜转移组织、16 例患者的大网膜组织和 3 例患者的腹水等样本队列；二是利用免疫组化技术检测蛋白表达水平；三是通过 CRISPR-Cas9 技术构建基因敲低细胞系；四是运用高通量 miRNA 测序筛选相关 miRNAs；五是借助 RNA 免疫沉淀和 miRNA 下拉实验验证蛋白与 miRNA 的相互作用。

研究结果如下：

1. hnRNPA2B1 与卵巢癌预后及转移的关系：分析多个数据库及进行免疫组化实验发现，hnRNPA2B1 在卵巢癌组织中高表达，且与高级别国际妇产科联盟（FIGO）分期、大网膜转移及不良生存预后相关。
2. hnRNPA2B1 对肿瘤转移的影响：构建小鼠原位移植瘤模型，敲低 hnRNPA2B1 后，肿瘤在体内的转移能力明显下降，大网膜转移减少，肿瘤组织中 MMP2、MMP9 和 Ki67 等蛋白水平降低。
3. hnRNPA2B1 与大网膜肌成纤维细胞的关系：对大网膜组织细胞亚群分析发现，myCAFs 在大网膜转移中起重要作用。hnRNPA2B1 表达与大网膜中 myCAFs 的活化相关，敲低 hnRNPA2B1 可抑制大网膜中 myCAFs 的活化和胶原沉积。
4. hnRNPA2B1 通过 sEVs 促进转移和肌成纤维细胞活化：纯化卵巢癌细胞来源的 sEVs，发现敲低 hnRNPA2B1 后，sEV 促进 ODPFs 迁移、侵袭和活化的能力显著降低，体内实验也证实敲低 hnRNPA2B1 的 sEVs 促进卵巢癌大网膜转移的能力减弱。
5. hnRNPA2B1 介导 miRNA 分选的机制：高通量 miRNA 测序、RIP 和 miRNA 下拉实验表明，hnRNPA2B1 通过识别 UAG 基序，直接结合 miR-21-5p、miR-29a-3p 和 miR-224-5p，将其分选到 sEVs 中。
6. sEV-miRNAs 激活 myCAFs 的机制：敲低 hnRNPA2B1 后，sEV 中成熟 miRNA 水平降低。过表达 miR-21-5p、miR-29a-3p 和 miR-224-5p 可促进 myCAF 活化，且这些 miRNAs 通过激活 PI3K/AKT 信号通路发挥作用。
7. sEV-activated myCAFs 对卵巢癌细胞的影响：体外实验和体内实验均表明，sEV 激活的 myCAFs 可促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭，敲低 hnRNPA2B1 或抑制相关 miRNAs 及 PI3K/AKT 信号通路，可减弱这种促进作用。

研究结论和讨论部分指出，该研究首次揭示了 hnRNPA2B1 在卵巢癌 sEV-miRNA 分选中的关键作用，为理解肿瘤转移机制提供了新视角。尽管目前对于 hnRNPA2B1 参与 sEV 分选的具体机制仍有许多未知之处，不同 miRNAs 在肿瘤中的功能也存在差异，但该研究为卵巢癌的治疗提供了新的潜在靶点和治疗思路，有望推动卵巢癌治疗领域的进一步发展。