非病毒工程 CARCIK-CD19 细胞治疗异基因移植后复发急性淋巴细胞白血病：安全且持久缓解的新希望

《Blood Cancer Journal》：Donor-derived CARCIK-CD19 cells engineered with Sleeping Beauty transposon in acute lymphoblastic leukemia relapsed after allogeneic transplantation

为解决 CAR-T 细胞疗法成本高、生产受限等问题，研究人员开展了利用睡美人（SB）转座子工程化供体来源的抗 CD19.CD28.OX40.CD3ζ T 细胞（CARCIK-CD19）治疗异基因造血干细胞移植（alloHSCT）后复发的 B 细胞前体急性淋巴细胞白血病（BCP-ALL）的研究。结果显示该疗法安全且能诱导缓解，为相关治疗提供新方向。

　　在癌症治疗领域，白血病一直是严重威胁人类健康的疾病。急性淋巴细胞白血病（ALL）作为白血病的一种，给患者带来了极大痛苦。目前，嵌合抗原受体 T 细胞（CAR-T）疗法虽在 ALL 治疗中展现出一定潜力，但面临诸多挑战。传统的 FDA/EMA 批准的 CAR-T 细胞疗法通过病毒载体对患者来源的细胞进行基因工程改造，在中心化制造设施中生产。然而，病毒载体的使用使得生产过程受到严格监管，需要专门的生物安全 2 级制造设施，成本高昂且生产周期长。此外，患者来源的细胞产品在获取目标细胞剂量时困难重重，尤其是晚期患者，他们往往淋巴细胞耗竭且血液中存在循环原始细胞。在这样的背景下，开展新的研究以寻找更有效、更经济且更易获取的治疗方法迫在眉睫。

意大利的研究人员针对上述问题展开了深入研究。他们利用睡美人（SB）转座子对供体来源的抗 CD19.CD28.OX40.CD3ζ T 细胞（CAR_CIK-CD19）进行工程化改造，用于治疗异基因造血干细胞移植（alloHSCT）后复发的 B 细胞前体急性淋巴细胞白血病（BCP-ALL）患者，并取得了重要成果。该研究成果发表在《Blood Cancer Journal》上，为白血病治疗带来了新的希望。

研究人员在这项研究中主要运用了以下关键技术方法：首先是细胞工程技术，通过电穿孔将表达 CD19 第三代 CAR 的 SB 质粒导入细胞，从而获得 CAR_CIK-CD19 细胞；其次是采用特定的细胞来源，选取之前移植供体的 50ml 外周血作为细胞源；最后是运用整合位点（IS）分析技术，通过基于超声处理的连接介导（SLiM）-PCR 方法，对基因组 DNA 进行分析，评估 SB 工程的生物安全性 。

研究结果

1. 产品和患者特征：从 2019 年 2 月至 2023 年 12 月，36 例 alloHSCT 后复发或难治的 BCP-ALL 患者接受了 CAR_CIK-CD19 细胞治疗。CAR-T 细胞由之前移植供体的外周血通过电穿孔转染 SB 质粒制备，成功为所有患者生产出细胞产品。最终细胞产品中 CD3⁺细胞占比高，平均转导效率为 33.5%。患者中位年龄 39 岁，多数患者接受过多种先前治疗，部分患者存在费城染色体阳性、髓外疾病等情况 。
2. 治疗安全性：细胞因子释放综合征（CRS）发生在 15 例患者（42%）中，均为 1 - 2 级，通过相应治疗后缓解。仅 1 例患者出现 2 级免疫效应细胞相关神经毒性综合征（ICANS），2 例患者出现 3 级迟发性外周神经病变。治疗后未发生移植物抗宿主病（GVHD），但部分患者出现感染并发症以及 3 级及以上的中性粒细胞减少和血小板减少 。
3. 治疗疗效：30 例患者（83%）达到总体缓解率（ORR），24 例可评估患者中 86% 实现微小残留病（MRD）阴性或阳性不可定量（PNQ）的完全缓解（CR）。患者 1 年总生存率（OS）为 57.0%，无事件生存率（EFS）为 32.0%，缓解持续时间（DOR）中位数为 8.1 个月，1 年 DOR 为 38.6%。此外，发现骨髓原始细胞水平与预后相关，前期接受 1 次 alloHSCT 且淋巴细胞清除后骨髓原始细胞水平 < 5% 的患者预后更好 。
4. CAR-T 细胞特性：所有患者均观察到 CAR-T 细胞扩增，中位峰值扩增为 38.1 个细胞 /μl，中位达峰时间为 10 天。CAR-T 细胞扩增与 CRS 发生相关，且在体内持续存在时间长，部分患者可检测到超过 2 年。同时，CAR-T 细胞可控制健康 B 细胞祖细胞的出现，维持 B 细胞发育不全，但部分患者在治疗后 3 - 6 个月出现 B 细胞恢复 。
5. 整合位点分析：对 15 例患者进行 IS 分析，结果显示 SB 转座子在基因组中的插入无偏好性，未发现对基因密集区域、转录起始位点和启动子区域的偏好。体外转导的 CAR_CIK-CD19 细胞具有高度多克隆性，输注后未观察到克隆优势，表明 SB 工程化的 CAR-T 细胞具有良好的生物安全性 。

研究结论与讨论

这项研究表明，使用 SB 转座子工程化的供体来源 CAR_CIK-CD19 细胞治疗 alloHSCT 后复发的 BCP-ALL 患者具有良好的安全性和有效性。该疗法可诱导长期缓解，即使在高疾病负担的患者中也具有可管理的毒性。与其他 CAR-T 细胞产品相比，其细胞因子升高水平较低，但 CAR-T 细胞的扩增和持久性相似。尽管研究中患者具有高难治性疾病特征，但 CAR_CIK-CD19 仍显示出较高的治疗潜力，与其他已获批的 CAR-T 细胞产品疗效相当，且在髓外疾病患者中也观察到了响应。此外，研究还发现序贯给予双抗原靶向治疗可能提高总体响应率。同时，研究证实了 SB 转座子在临床应用中的生物安全性，未观察到与插入相关的不良事件和克隆优势。综上所述，该研究为 CAR-T 细胞疗法在白血病治疗中的应用提供了新的思路和方向，为未来的临床实践和研究奠定了坚实基础，有望改善患者的治疗效果和预后。