新发现草鱼呼肠孤病毒株 GCRV-YX246：解析其特性，为草鱼出血病防控 “解锁” 新方向

《Virology Journal》：Identification and characterization of a novel reovirus strain isolated fromgrass carp (Ctenopharyngodon idella)

为解决草鱼出血病（GCHD）相关问题，研究人员开展了对草鱼呼肠孤病毒（GCRV）的研究。从患病草鱼中分离出新型毒株 GCRV-YX246，明确其基因组特征、致病性等。该发现有助于深入了解 GCRV-II 生物学特性，为 GCHD 防控策略研发提供依据。

　　在淡水养殖的世界里，草鱼是重要的经济鱼类，但草鱼出血病（Grass carp hemorrhagic disease，GCHD）却如同一颗 “定时炸弹”，严重威胁着草鱼养殖业。GCHD 由草鱼呼肠孤病毒（Grass Carp Reovirus，GCRV）引起，传染性强、致死率高，给水产养殖业带来了巨大的经济损失。而且，GCRV 的基因型多样，不同基因型毒株的毒力、致病机制等存在差异，目前对高毒力 GCRV 毒株的生物学、序列和毒力特征的研究还不够深入。同时，在病毒分离方面也面临难题，现有的细胞系对 GCRV-II 不敏感，分离出的病毒再感染草鱼难以产生明显症状和高死亡率。为了解决这些问题，中国科学院水生生物研究所的研究人员展开了深入研究。研究成果发表在《Virology Journal》上，为草鱼出血病的防控带来了新的希望。

研究人员采用了多种关键技术方法。首先是样本采集，从湖北黄石市阳新县农场获取患病草鱼，采集多种组织用于后续检测。组织学检测方面，对草鱼的脾脏（Spleen，SP）、头肾（Head kidney，HK）等组织进行处理，通过苏木精 - 伊红（Hematoxylin and eosin，H&E）染色观察病理变化，利用免疫荧光技术检测病毒。分子生物学技术上，提取 RNA 并制备 cDNA，运用巢式 PCR 和绝对定量聚合酶链反应（Quantitative polymerase chain reaction，qPCR）检测病毒 RNA 和病毒载量。还使用透射电子显微镜观察病毒粒子形态，通过病毒宏基因组测序、5’和 3’末端测序获取病毒基因组，进行生物信息学分析，构建系统发育树。最后通过人工感染实验评估病毒致病性。

研究结果如下：

• 独特的 GCRV-II 感染事件：通过临床检查、巢式 PCR、免疫荧光显微镜和透射电子显微镜（Transmission electron microscopy，TEM）分析，确认在大规模养殖的草鱼中发生了 GCRV-II 感染。肌肉和脑组织的病毒载量最高，免疫荧光显示病毒在多种组织存在，TEM 观察到病毒粒子呈球形，有两层衣壳。
• 组织学检查：H&E 染色发现，感染 GCRV-II 的草鱼 SP、HK、鳃和肠道组织出现严重病理损伤，如细胞质空泡化、细胞坏死、组织充血等。
• GCRV-YX246 的克隆：测定 GCRV-YX246 基因组长度为 24,751bp，G + C 含量为 49.95%，由 11 个片段组成，各片段编码单一蛋白质，具有保守的末端核苷酸序列。
• 序列分析：预测 GCRV-YX246 各基因组片段编码蛋白的功能，与其他相关病毒进行序列比对，发现其与 GCRV-HZ08 等 GCRV-II 毒株的相似性较高，但 S7 片段编码的 VP56 蛋白存在相对较高变异。
• 系统发育分析：基于 RNA 依赖的 RNA 聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp）和 VP6 蛋白氨基酸序列构建系统发育树，表明 GCRV-YX246 属于 GCRV-II 基因型，且与其他参考毒株存在显著差异，S11 蛋白序列有独特插入，被认定为新毒株。
• 人工感染实验：感染 GCRV-YX246 的草鱼和稀有鮈鲫出现典型出血症状，死亡率高，感染后第 4 天开始死亡，第 7 天达到高峰，累积死亡率超 90%。感染鱼的多个器官病毒载量高，组织学检查显示器官有坏死、红细胞浸润等病理变化。

研究结论表明，研究人员鉴定出了高毒力的 GCRV-YX246 毒株，通过序列比较和基因分型，对 GCRV 的遗传变异和进化有了更深入的认识。人工感染实验证明该毒株对草鱼和稀有鮈鲫具有高致病性。这些发现为开发 GCRV-II 疫苗、研究致病机制以及制定 GCRV 感染的防控策略奠定了基础。在讨论部分，研究人员指出，GCHD 是淡水养殖的严重威胁，虽然疫苗在一定程度上控制了疾病传播，但仍有零星爆发。此次研究对湖北某大型草鱼养殖场的 GCRV-II 感染事件进行了全面分析，有助于进一步了解病毒的致病机制和传播途径，为更有效地防控草鱼出血病提供了重要依据，在草鱼养殖产业的健康发展中具有重要意义。