预染Marker条带异常？别慌！先来看看你都踩了几个坑

预染Marker能实时追踪电泳进度，堪称Western Blot的“导航仪”，但用不好反而会“迷路”——条带模糊、缺失、上宽下窄/下宽上窄、颜色异常……本文从弥散、缺失、小分子不显、颜色异常、转膜失败五大痛点出发，深度解析预染Marker的隐藏“雷区”，附独家解决方案，实验人速速收藏！

一、条带弥散：预染Marker变“马赛克”？

• 上样量过多

上样量过多会导致蛋白在凝胶中扩散不均匀，从而出现弥散现象。建议减少上样量，按照说明书来操作。

• 电泳条件不当

电压过高或电泳时间过长会导致电泳缓冲液温度升高，进而使蛋白条带弥散。建议根据产品说明书调整电泳条件，避免长时间高电压运行。

• 凝胶浓度问题

凝胶浓度过低可能导致小分子蛋白弥散，而过高则可能影响大分子蛋白的分离。建议根据蛋白Marker的分子量范围选择合适的凝胶浓度。

自制凝胶浓度推荐（图片源自CST）

• 缓冲液问题

电泳缓冲液陈旧或pH值不在缓冲范围内，也可能导致条带弥散。建议使用新鲜的电泳缓冲液，并在使用前预冷缓冲液。

• 边缘效应

如果蛋白Marker放置在凝胶的边缘泳道，可能由于边缘效应导致条带变形或弥散。建议条件许可的条件下，尽量避免边缘条带。

二、条带缺失：预染Marker“中途消失”？

转膜前条带缺失

• 凝胶浓度选择不当

凝胶浓度过低可能导致小分子量条带无法很好地分散，而过高则可能使大分子量条带无法充分展开。建议根据蛋白Marker的分子量范围选择合适的凝胶浓度。

• 电泳时间不足或过长

电泳时间过短可能导致部分条带未能完全分离，而过长则可能使条带跑出凝胶。建议在溴酚蓝前沿刚跑出胶时停止电泳。

• 蛋白Marker降解

如果蛋白Marker本身降解或在电泳过程中降解，可能导致条带缺失。建议检查Marker的有效期和保存条件，避免反复冻融。

电泳及转膜后均无55KDa 条带

• 样品污染或交叉污染

如果相邻泳道的样品污染了Marker，可能导致条带异常。建议在操作过程中使用干净的试剂和耗材。

转膜后条带消失

• 转印方式选择不合适

预染Marker的>100 kDa蛋白需湿转（250 mA, 2小时）或半干转（25 V, 30分钟），半干转易遗漏大分子。

湿转转膜时间推荐（图片源自CST）

• 转印膜选择不当

0.45 μm PVDF膜孔径大，小分子预染蛋白（如10 kDa）易穿透，建议更换0.2 μm膜或硝酸纤维素膜。

三、小分子量蛋白“隐身”：预染也救不了？

• 凝胶浓度问题

小分子蛋白需要较低浓度的凝胶才能有效分离。如果凝胶浓度过高，小分子蛋白条带可能无法清晰显示。

• 电泳条件不当

电泳时间过长可能导致小分子蛋白条带跑出凝胶。建议适当缩短电泳时间。

• SDS结合不充分

小分子蛋白与SDS结合较少，在电场中迁移时容易弥散。建议优化电泳条件，如使用高浓度凝胶分离，增加浓缩胶比例以及控制电泳温度以免过度加热，增加样品上样量等。

四、颜色异常：预染Marker“褪色”或“变色”？

• 保存和使用问题

预染蛋白Marker保存不当（如反复冻融、暴露在高温或强光下）可能导致部分条带降解或颜色褪去。建议妥善保存Marker，并避免加热。

• 设备问题

电泳槽内存在气泡、电极连接不正确或电泳槽温度不均匀，可能导致条带显示异常。建议检查电泳设备，确保其正常运行。

• 缓冲液问题

转膜缓冲液中甲醇浓度过高（>20%）可能剥离预染蛋白的染料，使条带变淡或丢失。建议根据实验需求调整甲醇浓度至10%-15%，以确保转膜效果和条带清晰度。

相信大多数同学，尤其是新手师弟师妹都踩过绝大多数“坑”，预染Marker虽“聪明”，但也需小心伺候！从低温保存到转膜优化，每个细节都可能是成败关键。下次遇到条带异常时，对照这份攻略逐一排查，轻松搞定“消失的条带”！转发给战友，实验路上少走弯路！

下期揭秘以下问题，敬请关注

1、为什么Marker条带上宽下窄或者上窄下宽

2、标签抗体检测的Marker条带

3、Marker指示的蛋白大小和理论值有差异

4、还有能不能用于非变性胶

广告一波~~

好物推荐：

GENE 彩色预染预蛋白 Marker（10-180 KDa）

货号：PM-S001-10

优势：

1、条带锐利，分布均匀，分子量准确；

2、电泳/转膜均可获得清晰不弥散条带；

3、红绿蓝三色预染，标记位置符合常规使用习惯；

4、兼容SDS-PAGE和Bis-Tris （MOPS/MES）不同凝胶缓冲液体系！

包装规格：250 μl/支，10支/包

开学福利：2025.03.03-2025.04.04 特价促销￥1380/包，每下单1包即可获赠基因好运卡4张，上限8张！

欲了解更多产品详情，请扫码添加您的专属技术顾问，基因有限公司将以热忱与专业，为您提供最优质的服务！