新鲜出炉！新一代微流控单细胞分析筛选系统——实测数据表现！

Cyto-Mine® Chroma是一个全自动微流控单细胞分析筛选平台，能够包裹、分析、分选和分配活的单细胞。在上一代基础上，升级为4个激光器和4个检测器，扩大了其实用性，能够在皮滴内进行多路复用。整体工艺流程如图所示：细胞和检测试剂包裹在皮滴中，在孵育室内以最佳温度孵育，以分泌靶蛋白。分泌的靶蛋白在皮滴中积累，并被捕获。在分选过程中，Cyto-Mine® Chroma检测到分泌所需蛋白的细胞，并将其分配到组织培养板中。

Cyto-Mine® Chroma强大的多重功能，使其成为抗体发现和细胞系开发工作流程中分离特定细胞群的宝贵工具。那么，这台仪器的性能表现究竟如何？让我们一起来看看吧~

1 活细胞的准确分选和门控

将标记有蓝、绿、橙、红四个不同颜色膜染料的四个细胞样本混合并加载到Cyto-Mine® Chroma上。在分选过程中，用一种染料对细胞进行门控，排除所有其他染料，然后进行分配，四种细胞样本经过分选和分配的准确性分别为：蓝色＞98%，绿色＞99%，橙色＞97%，红色＞98%，可见Cyto-Mine® Chroma可实现对皮滴中包裹的活细胞的准确分选和门控。

图1：Cyto-Mine® Chroma分选和门控的准确性。（A）分选过程中门控的示意图。（B）检测使用的荧光染料列表。（C）门控策略的示例，用于分选相应的细胞群。（D）使用（C）中所示的门控策略分选的蓝、绿、橙和红色标记细胞的分配群的点图。（E）分配细胞的示例图。（F）使用分配细胞的显微镜数据来确定分选期间门控的准确性。

2 检测及分选抗体分泌细胞

为了检测分泌抗体的细胞，用不同的染料标记两种不同的杂交瘤细胞系并与抗小鼠IgG FRET探针对混合，加载到Cyto-Mine® Chroma上。在分选时首先通过FRET+响应然后对蓝色细胞进行门控并分配细胞。由图2F可知，细胞分选的准确度可达100%。

图2：分选抗体分泌细胞。（A）分选中检测和门控策略的示意图。（B）检测使用的荧光染料列表。（C）利用FRET+对细胞进行门控，然后仅对蓝色细胞进行门控。（D）分配的细胞群。（E）分配细胞的示例图。（F）使用分配细胞的显微镜数据来确定分选期间门控的准确性。

3 通过抗原特异性结合分选抗体分泌细胞

为了检测抗原特异性抗体结合，将分泌抗体的杂交瘤细胞（用蓝色标记）与表达特异性抗原的靶细胞（用红色标记）混合。使用绿色染料标记检测抗体来检测抗体与靶细胞的结合。将细胞加载到Cyto-Mine® Chroma上，并分选含有局部抗体分泌细胞（ASC）、靶细胞和检测抗体的液滴：在分选过程中对皮滴进行两次门控（图3F），首先检测ASC的存在和抗体结合，然后对靶细胞的存在进行门控。Cyto-Mine® Chroma的多路复用特性可以在单个实验中分析多个因素，从而提高筛选效率。

图3：通过表面结合实验分选ASC。（A）分选中检测和门控策略的示意图。（B）检测使用的荧光染料列表。在不存在（C）或存在（D）西妥昔单抗的情况下，将红色标记的A431靶细胞与绿色染料标记的抗体混合。将细胞加载到Cyto-Mine® Chroma上，并针对红和绿色信号进行门控。（E）使用FRET探针对检测ASC的IgG分泌。（F-G）在AF 488检测抗体存在下，将蓝色标记的ASC与红色标记的靶细胞混合。在分选过程中对皮滴进行两次门控（F），首先检测ASC的存在和抗体结合，然后对靶细胞的存在进行门控，并分配到96孔板中。（G）使用荧光显微镜对分配的细胞进行成像以验证门控筛选效果。

4 区分FRET+凋亡细胞与活细胞

将分泌人IgG 4κ抗体的CHO细胞系与Cyto-Cellect®探针对（供体偶联AF 488（绿色），受体偶联AF 594（橙色））和活性染料（偶联AF 670红色）混合。将细胞加载到Cyto-Mine® Chroma上并孵育1小时。对液滴进行门控，以确定是否存在FRET+活细胞。分配液滴，并使用Flowjo软件确定门控和分选的准确性。

图4：在皮滴中区分FRET+凋亡细胞与活细胞。（A）分选中检测和门控策略的示意图。（B）检测使用的荧光染料列表。（C）分选过程中细胞的门控。（D）活细胞与凋亡细胞群体中FRET反应的分析。

总的来说，Cyto-Mine® Chroma能够检测局部（抗体-抗原结合）和分散（IgG分泌，FRET信号）荧光，可根据特异性染色准确区分不同的细胞类型，可靠地用于细胞系开发（生产力和活力）以及抗体发现（生产力和抗原特异性）的多重检测。