CircNF1通过双重调控PD-L1促进食管鳞癌进展和免疫逃逸的机制研究

《Cellular & Molecular Biology Letters》：CircNF1 modulates the progression and immune evasion of esophageal squamous cell carcinoma through dual regulation of PD-L1

本期推荐：郑州大学第一附属医院团队发现circNF1通过激活STAT3转录和USP7介导的蛋白稳定性双重调控PD-L1表达，揭示了食管鳞癌（ESCC）免疫逃逸新机制。该研究为预测PD-L1抑制剂疗效提供新型生物标志物，并为联合免疫治疗策略开发奠定理论基础。

　　

食管癌是全球范围内高致死率的恶性肿瘤，其中食管鳞状细胞癌（ESCC）占病例总数的80%以上。尽管以PD-1/PD-L1抑制剂为代表的免疫检查点阻断疗法在ESCC治疗中取得突破，但临床响应率仍不足50%。这种治疗瓶颈主要源于肿瘤细胞复杂的免疫逃逸机制，特别是PD-L1表达的动态调控网络尚未完全阐明。与此同时，环状RNA（circRNA）作为新兴调控分子，在肿瘤发生发展中展现出多维度调控能力，但其在ESCC免疫微环境中的作用仍是未解之谜。

郑州大学第一附属医院王昌、鞠晨曦等研究人员在《Cellular & Molecular Biology Letters》发表的重要研究，首次系统揭示了circNF1通过表观遗传和翻译后修饰双重机制调控PD-L1表达的新范式。研究团队运用多组学技术联合作战：通过circRNA微阵列筛选发现circNF1与PD-L1治疗响应显著相关；采用ddPCR（微滴式数字PCR）和qRT-PCR在108对ESCC组织样本中验证其诊断价值；利用ChIRP-MS（染色质RNA纯化质谱）捕获ANXA1为关键互作蛋白；结合RNA-seq和细胞因子阵列阐明JAK-STAT3通路激活机制；并通过NSG小鼠人源化模型验证circNF1沉默可增强PD-L1阻断疗效。

研究结果部分，作者首先在"Identification and characterization of circNF1 in ESCC"中证实：circNF1来源于NF1基因第2-8外显子的反向剪接，在ESCC组织和血清中特异性高表达，其环状结构经RNase R和放线菌素D实验验证具有超强稳定性。随后的功能实验"CircNF1 impacts ESCC cell proliferation, migration, and invasion"显示：circNF1敲除使KYSE150和TE1细胞增殖率下降42%，侵袭能力减弱65%，而过表达则产生相反效应。

机制探索部分"CircNF1-mediated STAT3 phosphorylation drives PD-L1 transcription"揭示：RNA-seq分析发现circNF1沉默导致IL-6分泌减少，进而抑制STAT3酪氨酸705位点磷酸化（p-STAT3^Tyr705）。ChIP实验证实circNF1通过增强p-STAT3与PD-L1启动子的结合，使其转录水平提升2.3倍。在"CircNF1 destabilizes ANXA1 protein"章节中，分子对接显示circNF1与ANXA1蛋白C端第三重复结构域结合，阻碍USP7（泛素特异性蛋白酶7）对ANXA1的去泛素化作用，导致ANXA1蛋白半衰期从8小时缩短至3小时。

最关键的发现体现在"CircNF1 facilitates PD-L1 expression"部分：当circNF1占据ANXA1的USP7结合位点后，USP7转而更多结合PD-L1，使其泛素化水平降低60%，蛋白稳定性显著增强。这种"跷跷板"式调控使PD-L1在mRNA和蛋白两个层面同步上调。动物实验证实，circNF1 siRNA联合PD-L1单抗治疗可使肿瘤体积缩小78%，CD8⁺ T细胞浸润增加3倍，细胞毒性因子IFN-γ和GZMB分泌提升2倍。

在讨论环节，作者指出该研究具有双重革新意义：理论上，首次阐明circRNA可通过空间位阻效应改变蛋白互作网络，即circNF1如同"分子楔子"插入ANXA1-USP7复合物，重编程USP7的底物偏好性；临床上，队列研究显示circNF1联合PD-L1 CPS评分预测免疫治疗响应的AUC达0.897，优于现有单一指标。局限性在于NSG小鼠模型仅使用TE1细胞系，且未解析circNF1调控IL-6分泌的具体机制。这些发现为开发circNF1靶向的核酸药物联合PD-L1抑制剂提供了扎实的理论基础，也为ESCC精准免疫治疗带来了新的生物标志物体系。