Simvastatin 抑制 ILF3 调控 PD-L1 表达，为胃癌免疫治疗开辟新径

《Cell Death & Disease》：Simvastatin inhibits PD-L1 via ILF3 to induce ferroptosis in gastric cancer cells

胃癌治疗面临挑战，免疫治疗至关重要。山东大学齐鲁医院研究人员开展关于 Simvastatin 对胃癌细胞作用的研究，发现其可降低血清 ILF3 和 PD-L1 水平，诱导癌细胞铁死亡（Ferroptosis），增强免疫反应，为胃癌免疫联合治疗提供理论依据。

　　胃癌是全球范围内常见且致命的恶性肿瘤，尽管当前采用了以手术为主，化疗、免疫治疗为辅的综合治疗策略，但晚期胃癌患者的五年生存率仍低于 30%。化疗耐药、复发和远处转移成为治疗失败的主要因素，因此探寻新的诊断和治疗机制及靶点迫在眉睫。在这样的背景下，山东大学齐鲁医院的研究人员开展了一项意义重大的研究，相关成果发表在《Cell Death and Disease》杂志上。

研究人员为了深入探究 Simvastatin（一种他汀类药物）在胃癌治疗中的作用机制，进行了一系列实验。在技术方法上，研究人员收集了山东大学齐鲁医院 2017 年 1 月至 2019 年 12 月胃癌患者的临床样本，包括血清、癌组织和癌旁组织。同时使用了多种细胞系，如胃癌细胞系（Ncl-N87 和 HGC-27）、小鼠前胃癌细胞系（MFC）和人胚肾细胞系（HEK293T）进行体外实验。通过转染小干扰 RNA（siRNAs）和过表达质粒，改变基因表达水平。运用蛋白质免疫印迹法（Western blotting，WB）检测蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测 RNA 水平，免疫组化（IHC）染色分析蛋白表达定位和水平。此外，还进行了动物实验，构建裸鼠和 615 小鼠皮下肿瘤模型，以研究药物在体内的作用效果 。

研究结果部分：

1. Statins 靶向 ILF3 提高胃癌患者化疗敏感性：研究人员将接受术前新辅助化疗的胃癌患者分为使用和未使用 Statins 两组，通过肿瘤退缩分级（TRG）系统评估发现，使用 Statins 组肿瘤退缩更明显，对化疗更敏感。该组血清 ILF3 水平显著降低，且 ILF3 高表达与患者较差的总生存期（OS）和无进展生存期（PPS）相关12。
2. ILF3 抑制 PD-L1 表达并增强活化 CD8? T 细胞对胃癌细胞的杀伤作用：依据患者是否使用 Statins 以及 ILF3 和 PD-L1 的表达水平分组，结果显示使用 Statins 组、低 ILF3 和低 PD-L1 表达组肿瘤退缩更显著。ILF3 与 PD-L1 表达呈正相关，敲低 ILF3 可减少 PD-L1 分泌，增强活化 CD8? T 细胞对胃癌细胞的杀伤作用34。
3. Simvastatin 抑制 ILF3 表达并诱导胃癌细胞铁死亡：Simvastatin 能浓度依赖性抑制 ILF3 表达，诱导胃癌细胞死亡。与铁死亡抑制剂 Ferrostatin-1（Ferr-1）共刺激可显著提高细胞活性，表明 Simvastatin 可诱导铁死亡。同时，敲低 ILF3 或使用 Simvastatin 刺激会降低 SLC7A11 和 GPX4 的表达，引发细胞内铁离子（Fe2?）、活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）水平升高，谷胱甘肽（GSH）/ 氧化型谷胱甘肽（GSSG）比值降低等铁死亡相关变化56。
4. Simvastatin 通过抑制 PD-L1 表达影响活化 CD8? T 细胞对胃癌细胞的杀伤作用：Simvastatin 浓度依赖性抑制胃癌细胞中 PD-L1 蛋白表达。过表达 PD-L1 会减弱 Simvastatin 诱导的活化 CD8? T 细胞对胃癌细胞的杀伤作用，同时改变细胞内铁死亡相关指标，如 GSH/GSSG 比值、MDA 水平、ROS 水平、Fe2?水平和脂质过氧化（LPO）水平等78。
5. Simvastatin 通过降低 H3K14ac 水平抑制 ILF3 表达：通过预测发现 Simvastatin 可能靶向 HDAC1、HDAC2 和 HDAC6，进而抑制 ILF3 表达。实验表明，Simvastatin 可使 HDAC6 表达增加，降低 ILF3 的 H3K14 位点乙酰化水平，从而抑制 ILF3 表达910。
6. ILF3 通过 DEPTOR/mTOR 信号通路调节 PD-L1 表达和铁死亡：通过 KEGG 富集分析发现 ILF3 调节 mTOR 信号通路，双荧光素酶报告实验证实 ILF3 与 DEPTOR 启动子区域结合，调节其转录。敲低 ILF3 会使 DEPTOR 蛋白水平增加，p-mTOR 蛋白水平降低，影响 PD-L1、SLC7A11 和 GPX4 的表达，进而调控铁死亡和免疫逃逸1112。
7. Simvastatin 通过抑制 ILF3 表达诱导裸鼠胃癌细胞铁死亡：构建稳定表达 ILF3 的胃癌细胞系并接种到裸鼠体内，结果显示抑制 ILF3 和使用 Simvastatin 可有效抑制皮下肿瘤的增殖和重量。同时，ILF3 敲低和 Simvastatin 刺激会降低 ILF3 和 PD-L1 蛋白水平，增加 4-HNE 表达，表明诱导了铁死亡1314。
8. Simvastatin 与抗 PD-L1 疗法协同在 615 小鼠中发挥治疗作用：构建稳定表达 ILF3 的 MFC 细胞系并接种到 615 小鼠体内，发现高表达 ILF3 促进肿瘤生长，Simvastatin 与抗 PD-L1 联合使用可显著降低肿瘤负担。IHC 染色显示 Simvastatin 与抗 PD-L1 疗法具有协同作用，可促进 CD8? T 细胞浸润，上调 4-HNE 表达，诱导铁死亡1516。

在结论与讨论部分，研究表明 Simvastatin 通过增加 HDAC6 表达，降低 ILF3 在 H3K14 位点的乙酰化水平，从而下调 ILF3 表达。ILF3 下调通过 DEPTOR/mTOR 信号通路降低 SLC7A11/GPX4 表达，诱导铁死亡。同时，ILF3 抑制 PD-L1 表达，促进 CD8? T 细胞的招募和杀伤活性，增强抗肿瘤免疫反应。这一研究揭示了 Simvastatin 在胃癌免疫治疗中的重要作用，为胃癌的联合免疫治疗提供了新的理论依据和潜在治疗策略，有望改善胃癌患者的预后 。