成功构建 CD34+造血干细胞源高白细胞急性髓系白血病异种移植模型，为精准医疗开辟新路径

《BMC Cancer》：Establishment of CD34?+?hematopoietic stem cell-derived xenograft model of hyperleukocytic acute myeloid leukemia

高白细胞急性髓系白血病（HLL）早期死亡率高、治疗困难，相关研究处于起步阶段，HLL 患者来源的异种移植（PDX）模型开发受限。武汉大学中南医院研究人员构建 HLL 的 PDX 模型，成功建立 CD34+造血干细胞源异种移植模型，为相关研究提供有力工具。

　　高白细胞急性髓系白血病（Hyperleukocytic acute myeloid leukemia，HLL）是白血病中极为凶险的亚型，患者外周血白细胞计数常常超过 50 - 100×10⁹/L。大量异常增殖的白细胞就像一群失控的 “坏家伙”，不仅让血液变得黏稠，还会引发白细胞淤滞，进而侵犯肺、肝、中枢神经系统等多个重要器官。患者往往面临着极为严峻的预后，早期死亡率高达 40% ，多种致命并发症让病情雪上加霜。传统的白血病小鼠模型大多通过移植永生化细胞系构建，然而这些细胞系在培养过程中会 “变味”，发生表型改变，无法真实呈现 HLL 的疾病状态，使得研究人员难以深入了解 HLL 的复杂机制，寻找有效治疗方法更是困难重重。

为了攻克这一难题，武汉大学中南医院的研究人员挺身而出。他们利用严重免疫缺陷的 NOD.CB17 - Prkdc^scid Il2rg^tml/Bcgen（B - NSG）小鼠，致力于构建 HLL 模型。最终成功建立了 CD34⁺造血干细胞源的 HLL 异种移植模型，这一成果发表在《BMC Cancer》上，为 HLL 的研究带来了新的曙光。

研究人员开展此项研究时，采用了多种关键技术方法。从武汉大学中南医院新诊断的 HLL 患者处收集白血病细胞，分离外周血单个核细胞（PBMCs）和骨髓来源细胞。运用 CD34 微珠试剂盒分离 CD34⁺细胞，将不同来源的细胞注入经不同剂量 X 射线照射的 B - NSG 小鼠构建模型。通过常规血液检查、涂片分析、骨髓活检、流式细胞术、RNA 提取及定量实时 PCR（qPCR）检测、NRAS 突变分析等技术对模型进行评估 。

研究结果如下：

• 构建基于患者 PBMCs 的 HLL 模型：将患者 PBMCs 注入 B - NSG 小鼠构建模型，2.5 Gy 照射组小鼠体重下降，存活时间短；非照射组小鼠白细胞计数最高可达 37.35×10⁹/L，血液、骨髓中可检测到白血病细胞，且免疫表型分析显示 hCD45⁺、hCD15⁺和 hCD33⁺细胞比例增加，肝脏和脾脏有大量白血病细胞浸润，表明该模型成功建立。
• 构建基于患者骨髓来源细胞的 HLL 模型：尝试不同照射剂量后，选用 1.5 Gy 照射，用患者骨髓来源细胞构建模型。1.5 Gy 照射组小鼠体重和生存情况比 0 Gy 组差，但血液和骨髓中可检测到人类白血病细胞，且免疫表型比例增加，模型构建成功。
• 成功构建 CD34⁺细胞源异种移植模型：构建 CD34⁺造血干细胞源异种移植模型，第 9 天检测到 hCD45⁺和 hCD34⁺细胞比例较高，血液和骨髓中可观察到白血病细胞。第 25 天，CD34⁺细胞浸润到骨髓、肝脏和脾脏组织，且检测到 WT1 基因阳性和 NRAS 突变，模型构建成功。
• 总结构建的 HLL 模型：通过多次重复实验发现，较高的 2.5 Gy 照射剂量、更多的 PB 来源细胞注射量会使小鼠生存时间缩短；携带 NRAS、DNMT3A、FLT3 或 NPM1 基因突变的细胞会缩短小鼠生存时间；小鼠生存时间与患者生存状态显著相关。

在讨论部分，研究人员指出，B - NSG 小鼠的使用有效促进了 HLL 细胞的植入，减少了移植物抗宿主病（GVHD）的发生。同时发现，非照射小鼠更适合药物研究，而照射会导致骨髓抑制，影响模型评估和小鼠生存时间。此外，HLL 细胞的恶性基因突变、注射细胞数量和照射剂量都会影响模型构建。虽然该模型存在一定局限性，如 HLL 细胞体外增殖困难、无法完全模拟临床特征、难以复制复杂免疫微环境等，但仍然为 HLL 的发病机制研究、药物筛选、个体化治疗、临床疗效评估和精准医学提供了宝贵的工具，有助于推动 HLL 治疗领域的发展，为患者带来新的希望。