Takara SARS-CoV-2假病毒包装系统

Takara把慢病毒包装系统中的包膜蛋白表达载体替换成为S蛋白表达载体，包装制备出包膜蛋白为S蛋白的SARS-CoV-2假慢病毒，替代SARS-CoV-2病毒开展研究。

在开发COVID-19疗法的过程中，其中一个常见步骤就是要证明该疗法对SARS-CoV-2病毒的感染具有抑制作用。然而处理真正的SARS-CoV-2病毒需要更为严苛的安全条件，生物安全防护水平为3级，这比处理慢病毒的生物安全防护水平还要高一级。基于安全措施考虑，目前研究人员大多使用带有SARS-CoV-2刺突蛋白（spike protein）的假病毒（Ni et al. 2020, Shang et al. 2020）替代SARS-CoV-2病毒开展COVID-19疗法相关研究。

SARS-CoV-2假病毒目前已被应用于新冠疫苗开发研究。为了确保疫苗的有效性，使用SARS-CoV-2假病毒开展中和试验，以确定接种受试者的抗血清是否能抑制SARS-CoV-2假病毒的感染。除了疫苗开发之外，SARS-CoV-2假病毒也被用于抗体药物开发研究中：通过中和试验，验证候选抗体是否可以抑制SARS-CoV-2假病毒的感染。当然，也可以用于基础研究，比如可以用于比较SARS-CoV-2和SARS-CoV病毒刺突蛋白的功能。

关于SARS-CoV-2假病毒的包装制备，目前主要是借助现有的慢病毒包装系统，优化改进后用于包装制备SARS-CoV-2假病毒。根据科学家们的研究，新冠病毒主要依靠病毒表面的刺突蛋白，也就是S蛋白，通过与人体细胞表面受体ACE2的结合入侵人体，所以我们把慢病毒包装系统中的包膜蛋白表达载体替换成为S蛋白表达载体，包装制备出包膜蛋白为S蛋白的SARS-CoV-2假慢病毒，替代SARS-CoV-2病毒开展研究。

Takara推出的SARS-CoV-2假病毒包装系统很有技术亮点。

它由5个独立组件组成，并且5个组件按照特定的优化比例混合，提高了病毒包装性能。在这个包装系统中，gag，pol和env基因被分离开来，可以进一步降低RCL（复制型慢病毒）产生的概率。事实上，有文献报道，使用这种方法并没有检测到RCL（复制型慢病毒）的出现（Wu et al., 2000）。这些改进显著提高了这款包装系统的生物安全性。在病毒滴度方面，pol基因与vpr基因的融合可以确保反转录酶/整合酶蛋白质能够转运到重组慢病毒粒子中，从而确保每病毒粒子中包含更多的反转录酶和整合酶，确保更高的转导效率和整合效率。在这个包装系统中，还包含了Tet-Off和tat反式激活因子，可以驱动病毒必需成分高水平表达，产生诱导级联表达反应，从而可以制备出高滴度SARS-CoV-2假病毒。而在第三代慢病毒包装系统中，通常gag和pol序列是不分离的，也没有使用反式激活级联机制。应用数据显示，转导ACE2-HEK293T细胞所产生的功能滴度可达到为10⁷–10⁸ IFU/ml。

预制冻干粉形式，使用方便，降低操作误差。

为了方便使用，这款包装系统打破了传统形式，采用了预混的冻干粉形式。将慢病毒包装质粒和转染试剂预混后进行预分装和冻干处理，所以不再额外需要添加转染试剂。对于研究人员来说，操作非常简便，一管一个反应，只需要一步操作流程：那就是只需加入目标基因表达质粒就可以了。这种包装形式还可以在很大程度上降低操作误差，确保不同样品和批次间的一致性。

完善的后续配套支持。

• 基于ELISA的滴度测定方法

Lenti-X p24 Rapid Titer Kit适用于检测基于HIV-1慢病毒载体的上清液滴度。该试剂盒可以特异性检测p24衣壳蛋白质，通过与p24标准品制作的标准曲线相比较，就可以获得检测样品的病毒滴度。

• 10分钟智能化滴度测定方法

Lenti-X GoStix plus将慢病毒验毒棒和一款简便的手机APP相结合，通过检测慢病毒p24蛋白质可快速定量测定慢病毒滴度。先使用已知滴度的慢病毒建立IFU/GV ratio，通过样品测定的GV值（GoStix Value）计算出相应的IFU/ml值。

• 方便使用的转导滴度测定方法

Lenti-X Provirus Quantitation Kit采用qPCR方法快速测定转导后的靶细胞中整合的慢病毒的拷贝数（前病毒）。通过测定靶细胞中前病毒的拷贝数，可以确定有效的慢病毒转导滴度，从而更加有效地感染靶细胞。

除此之外，还有基于qRT-PCR方法的病毒滴度测定方法、简便快速高效的病毒浓缩方法和基于重力流的病毒纯化方法可供选择。

Code No.	产品名称	包装量	刺突蛋白类型
632668	Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Full Length)	12 Rxns	野生型（全长）
632669	Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Full Length)	12 Rxns	D614G变异型（全长）
631292	Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Full Length)	12 Rxns	B.1.351变异型（全长）
632670	Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Truncated)	12 Rxns	野生型（Truncated）
632671	Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Truncated)	12 Rxns	D614G变异型（Truncated）
631293	Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Truncated)	12 Rxns	B.1.351变异型（Truncated ）

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