基于PCR的CRISPR-Cas13a高灵敏高特异乙肝病毒及其耐药突变检测新方法

　　

解放军疾病预防控制中心宋宏彬研究员团队利用LwCas13a联合PCR扩增技术建立了乙肝病毒DNA及其常见耐药突变YMDD检测新方法PCR-CRISPR，该技术为乙肝病毒尤其是低病毒载量样本的高效检测提供了有力工具。

慢性乙型肝炎是目前最突出的全球性公共卫生问题之一，严重威胁人类健康。尽管乙肝疫苗的使用有效降低了乙肝的发病率，每年仍有1-3千万人感染乙肝病毒，约有1百万人死于乙肝感染及其并发症。

近年来，新的RNA靶向技术CRISPR-Cas13a已被开发为一种可检测痕量核酸的高灵敏、高特异性检测技术，通过结合RPA等温扩增技术可实现对单拷贝核酸和单碱基突变的准确检测和鉴定。课题组将临床检测中使用更加广泛的PCR扩增技术与Cas13a相结合，设计分别针对乙肝病毒DNA及YMDD耐药突变的特异性crRNA，实现了对低至单拷贝的HBV DNA及YMDD耐药突变的高灵敏度检测。

血清样本检测结果显示，新建立的PCR-CRISPR方法和数字PCR在10例qPCR判定为阴性的血清样本中检测出HBV DNA，表明该技术对HBV DNA检测的灵敏度明显高于qPCR。在针对YMDD耐药突变的检测中，PCR-CRISPR在12例HBV DNA浓度低于100IU/mL的血清样本中检测出了qPCR和直接测序法均未检测到的YMDD耐药突变（4例YVDD和8例YIDD），充分表明该技术灵敏度较qPCR高，且更适用于低浓度HBV DNA样本的检测。

PCR-CRISPR技术实现了低载量HBV样本中病毒核酸和YMDD耐药突变的高灵敏检测，对于降低输血和肝移植中HBV感染的风险、减少抗病毒治疗停药后的乙肝复发率等具有重要的临床指导意义。该研究发表在今年近期出版的国际专业学术期刊《Clinical Microbiology and Infection》上。

原文检索：
Highly sensitive and specific detection of HBV DNA and drug resistance mutations utilizing the PCR-based CRISPR-Cas13a system