你以为做完m6A测序后就完了？m6A-IP-qPCR了解下！

今天的文章将围绕m6A测序后必须要了解的一种定量技术——m6A-IP-qPCR（也叫MeRIP-qPCR）。

所谓m6A-IP-qPCR也叫MeRIP-qPCR，即利用m6A抗体在富集到带甲基化修饰的RNA后，下一步使用qPCR直接对富集到的RNA进行定量的一种技术。

这种技术可以做到对发生甲基化的RNA进行相对定量，是一种低成本的检测方法，仅需m6A抗体，A/G免疫磁珠，磁力架和qPCR仪及配套试剂盒即可开展这类实验。

第一步：提取total RNA，作为可选步骤可以用OligodT磁珠富集带polyA尾的mRNA。
第二步：将A/G免疫磁珠和m6A抗体按照试剂盒的标准步骤进行预混，配制免疫磁珠抗体预混液。
第三步：将预混好的免疫磁珠m6A抗体加入total RNA或mRNA中，若RNA上的腺嘌呤上带有m6A甲基化修饰，则m6A抗体会与之相结合。
第四步：采用磁力架对m6A免疫磁珠进行富集。
第五步：用蛋白酶对富集到的RNA-抗体复合物进行消化，m6A抗体被消化完后只剩下RNA。
第六步：进入常规的qPCR的步骤。

当然这里需要注意的是，这类实验仅仅是对发生RNA甲基化的基因进行相对定量检测，甲基化程度高应该还要和基因本身的转录水平相结合。MeRIP-qPCR还需要结合其他实验，如常规的qPCR、WB等才能从多个角度来验证，最终得到想要的结果。

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