台式高分辨率质谱系统快速鉴定药物杂质

【字体: 时间:2017年04月26日 来源:赛默飞

编辑推荐:

  杂质分析对于药物的研发至关重要。在研究过程中,杂质谱信息能帮助药物化学家优化合成路线和避免潜在的有毒杂质。在开发过程中,当大量母体化合物存在时,鉴定和表征痕量杂质至关重要,从而促进了高分辨率、高灵敏度和高扫描速度的 HR-MS 仪器和智能化结构鉴定软件的发展。

  

前言

杂质分析对于药物的研发至关重要 1。在研究过程中,杂质谱信息能帮助药物化学家优化合成路线和避免潜在的有毒杂质。在开发过程中,当大量母体化合物存在时,鉴定和表征痕量杂质至关重要,从而促进了高分辨率、高灵敏度和高扫描速度的 HR-MS 仪器和智能化结构鉴定软件的发展。

 

为了展示 HR-MS 在杂质分析和结构鉴定方面的能力,本文选用了市售药物奥美拉唑。本研究采用了赛默飞世尔科技的 Q Exactive 台式 Orbitrap 质谱仪和数据处理软件 Mass Frontier 来快速分析和鉴定奥美拉唑中杂质的结构。

方法

材料与试剂

奥美拉唑(CAS# 73590-58-6)购自 Sigma-Aldrich,产品号O104-100MG

乙腈和水来自 Fisher Scientific

乙酸铵购自 Sigma-Aldrich,产品号 73594-25G-F。甲酸购自 Sigma-Aldrich,产品号 33015-500ml

 

 

样品前处理

奥美拉唑溶液(0.5 mg/mL)配制在1:1 乙腈/ 水混合溶剂中。

 

HPLC 方法

色谱分离采用 Ultimate3000 UHPLC 系统。

色谱柱:Hypersil GOLD 柱,2.1mm×150mm,粒径 3 μm.

柱温:35,流速:0.5 mL/min,进样体积:8 μL

流动相:A - 水;B - 乙腈;C -100 mM 乙酸铵,用乙酸调节 pH 值到 5

 

梯度洗脱:

时间(min           A%                   B%                   C%


0

80

20

5

13.0

20

60

5

15.0

20

80

5

16.0

10

80

5

16.1

10

20

5

20.0

80

20

5

质谱方法

质谱分析采用 Q Exactive 质谱仪的电喷雾正离子模式。在70,000 35,000 分辨率 FWHM@m/z 200 下分别采集高分辨全扫描一级质谱数据和数据依赖 Top3 二级质谱数据。

 

离子源条件:

Q Exactive 方法参数:

结果与讨论

离子化模式:正离子 ESI

AGC 目标(全扫描):3e6

I. 高分辨率全扫描 -HCD MS/MS 鉴定杂质

离子源:HESI-II

AGC 目标(MS/MS):1e5

采集得到奥美拉唑的高分辨率全扫描和三个最高强度的

鞘气流速:45 单位 N2

NCE3035% 阶梯变化

数据依赖 HCD MS/MS 数据。HRAM 全扫描和 MS/MS 数据

辅助气流速:10 单位 N2

扫描范围(全扫描 MS):

提供了分子量和碎片信息。HCD(高能量碰撞解离)得到

喷雾电压(KV):+3.5

180 1200 amu

了丰富的 MS/MS 碎片和低质量端碎片信息。利用 Mass

毛细管柱温度():320

Frontier 软件与这些信息互相配合,我们不仅快速检测出

S-lens RF 水平:50.0

奥美拉唑的主要杂质,而且可靠地测定了相应的元素组

加热器温度():400

成,如图 1&2 和表 1 所示。

 

 

 

1. 奥美拉唑的质谱总离子流图

 

 

 

2. 奥美拉唑的高分辨率准确质量数全扫描和 MS/MS 谱图

 

 

 

 

 

                                                 3. Mass Frontier FISh 功能鉴定杂质

 

 

 

1. 已识别杂质的准确质量数和元素组成

 

峰识别号

分子式

M+H)计算值

M+H)测量值

误差 (ppm)

母离子

C17H19N3O3S

346.1220

346.1228

-0.5

1

C16H17N3O2S

316.1114

316.1116

0.5

2

C17H19N3O3S

362.1167

362.1172

0.7

3

C16H17N3O2

284.1394

284.1396

0.7

4

C17H19N3O3S

389.1278

389.1281

0.8

5

C18H21N3O4S

376.1326

376.1331

1.5

5’

C18H21N3O4S

376.1326

376.1323

-0.7

5’’

C18H21N3O4S

376.1326

376.1331

1.5

6

C18H18N4O2S

355.1223

355.122

-0.8

7

C17H19N3O3S

362.1169

362.1165

-1

8

C18H21N3O3S

360.1376

360.1375

-0.8

9

C26H27N5O5S2

554.1526

554.1535

1.5

9’

C26H27N5O5S2

554.1526

554.1535

1.6

10

C18H20N3O3SCl

394.0987

394.0993

1.5

10’

C18H20N3O3SCl

394.0987

394.0996

1.5

11

C17H19N3O5S

330.1272

330.1271

0.4

12

C28H29N2O5S2

538.1591

538.1596

0.3

13

C23H42N8O12S2

687.2436

687.2432

-0.7

14

C17H18N2O3S

331.1111

331.1112

0.5

 
 
 
II. Mass Frontier 用于未知物的结构鉴定 
 

图 4. m/z 为 376.1331 的杂质的三个同分异构体

 

索取文献了解Thermofisher台式高分辨率质谱系统快速鉴定药物杂质的策略

结论

 

Q Exactive 台式 Orbitrap 系统能实现全扫描和 MS/MS 数据的高分辨率准确质量数测定(HRAM),为未知杂质的结构鉴定提供至关重要的分子量和结构信息:HRAM 全扫描准确测定元素组成,而 HRAM MS/MS 能准确测定杂质成分。

 

Mass Frontier 碎片离子搜索(FISh)和“Fragment and Mechanism”功能,通过搜索 HighChem 碎片数据库准确鉴

定未知物的结构。

 

Q Exactive HRAM 数据和 Mass Frontier 软件组成的工作流程能帮助研究人员在药物研究的早期高效准确地鉴定每批次 API 中的杂质。

 

参考文献

 

1.   FDD Guidance for Industry, Q3A (R2) Impurities in New Drug Substances

 
 

濠电姷鏁搁崑鐐哄垂閸洖绠伴柟闂寸贰閺佸嫰鏌涢锝囪穿鐟滅増甯掗悙濠囨煃鐟欏嫬鍔ゅù婊堢畺閺岋綁鎮㈤悡搴濆枈濠碘剝褰冨﹢閬嶅焵椤掑喚娼愰柟绋挎憸閳ь剚绋堥弲婵嬪焵椤掑嫭娑ч柕鍫熸倐瀵偊宕掗悙鏉戔偓閿嬨亜閹哄秶鍔嶉柣锕€閰e铏规嫚閹绘帩鍔夌紓浣割儐鐢€崇暦濠靛绠虫俊銈傚亾缂佲偓婢舵劖鐓熼柡鍐ㄥ€哥敮鑸垫交濠靛洨绡€闁汇垽娼у瓭濠电偠灏欐繛鈧€规洘鍨块獮姗€骞囨担鐟板厞闁诲氦顫夊ú鏍洪妸鈺傚仼闁惧繐婀辩壕浠嬫煕鐏炲墽鎳呮い锔奸檮娣囧﹪顢曢敐鍥╃厜閻庤娲樺ú鐔笺€侀弮鍫濆窛妞ゆ牭绲剧粊顐︽⒒娴g懓顕滅紒璇插€块幃褔骞樺鍕枔閳ь剨缍嗛崰妤呮偂濞嗘劗绠鹃柤濂割杺閸ゆ瑦顨ラ悙杈捐€块柡灞炬礋瀹曞爼濡搁妷銉︽嚈闁诲孩顔栭崳顕€宕滈悢鑲╁祦鐎广儱顦介弫濠囨煟閿濆懏婀版繛鍫熸倐濮婄粯鎷呴挊澶夋睏闂佺儵鍓濆Λ鍐ㄧ暦瑜版帗鎯炴い鎰剁稻閻濈兘姊虹粔鍡楀濞堟洘銇勯妷銉уⅵ闁哄本鐩獮姗€鎳犻澶嬓滃┑鐐差嚟婵參宕归崼鏇炶摕闁哄洢鍨归獮銏′繆閵堝拑宸ラ柛鎾讳憾閺岋綁濮€閳轰胶浠繝銏㈡嚀濡宓勯梺鍦濠㈡﹢锝為崨瀛樼厽婵炲棗鑻禍鎯р攽閻愯尙婀撮柛濠冩礋濠€渚€姊洪幐搴g畵婵☆偅鐟х划鍫⑩偓锝庡枟閻撳啰鎲稿⿰鍫濈婵﹩鍘鹃埞宥夋煣韫囨凹娼愮€规洘鐓¢弻娑㈠箛閵婏附鐝栧銈傛櫇閸忔﹢寮婚妸銉㈡斀闁糕剝鐟ラ埅闈涒攽閳藉棗鐏犳い鎴濐樀瀵鈽夐姀鐘殿唺闂佺懓顕崕鎰涢敓鐘斥拺閻犲洤寮堕崬澶娾攽椤斿搫鈧鍒掑鑸电劶鐎广儱鎳愰ˇ銊ヮ渻閵堝棙灏靛┑顔惧厴椤㈡瑩骞掑Δ浣叉嫼闁荤姴娲犻埀顒冩珪閻忎線姊洪崨濠冪叆濡ょ姵鎮傞崺銏ゅ箻鐠囪尙顓洪梺鎸庢濡嫬鈻撻妷銉富闁靛牆妫涙晶顒傜磼椤旇偐鐒搁柛鈺傜洴瀵粙顢橀悢鍝勫箞婵犵數鍋涘Λ娆撳礉閺囥垺鍊堕柍鍝勫亞濞堜粙鏌i幇顒€绾ч柛鐘筹耿閺岀喖顢涘姣櫻呪偓娈垮櫘閸o絽鐣烽幒鎳虫梹鎷呯憴鍕絻

10x Genomics闂傚倸鍊风粈渚€骞栭锕€纾归柣鐔煎亰閻斿棙鎱ㄥ璇蹭壕濡ょ姷鍋為悧鐘诲灳閺傝¥鈧帗鍒婇悥鍓坢 HD 闂備浇顕х€涒晠顢欓弽顓炵獥闁圭儤顨呯壕濠氭煙閸撗呭笡闁绘挻娲橀幈銊ノ熼悡搴′粯闂佽绻掓慨鐑藉焵椤掑喚娼愭繛鍙夌矒瀹曚即骞橀懜娈挎綗闂佸湱鍎ら〃鍛寸嵁閵忊剝鍙忔慨妤€妫楁晶顔尖攽椤旂厧鏆f慨濠冩そ瀹曘劍绻濋崒婊呮噯婵犵妲呴崑鍛垝瀹ュ桅闁哄啫鐗嗙粻鐟懊归敐鍥ㄥ殌濞寸姰鍨藉娲箹閻愭彃濮夐梺鍝勬噺缁捇骞冩ィ鍐╃劶鐎广儱妫涢崢閬嶆椤愩垺鎼愭い鎴濇噺閹便劑鍩€椤掆偓閳规垿鎮欑€涙ḿ绋囧┑鈽嗗亝缁挻淇婇悽绋跨疀闁哄鐏濆畵鍡涙⒑缂佹ǘ缂氶柡浣规倐閹剝鎷呴搹鍦紳婵炶揪绲介幉鈥筹耿閻楀牅绻嗛柣鎰煐椤ュ鎽堕悙鐑樼厱鐟滃酣銆冮崨顖滅焼闁糕剝绋掗悡鏇㈡煃閳轰礁鏆堢紓鍌涘哺閺屽秷顧侀柛蹇旂〒閸掓帒鈻庨幘铏€悗骞垮劚椤︿即寮查幖浣圭叆闁绘洖鍊圭€氾拷

婵犵數濮烽弫鎼佸磻濞戞娑欐償閵娿儱鐎梺鍏肩ゴ閺呮粌鐣烽弻銉﹀€甸柨婵嗛娴滅偤鏌嶇紒妯活棃闁诡喗顨婇弫鎰償閳ュ磭顔戠紓鍌欐閼宠泛鈻嶆晶淇皊t闂傚倸鍊风欢姘缚瑜嶈灋婵°倕鎳忛弲婵嬫煥濠靛棙宸濈紒鐘虫煥椤潡鎳滈棃娑橆潓濠碘槅鍋呰摫闁靛洤瀚伴獮妯兼崉鏉炴壆鎹曠紓鍌氬€哥粔宕囨濮樿泛钃熸繛鎴欏灩閸愨偓闂侀潧臎閸愶絾瀚涘┑鐘垫暩閸嬫盯鎮ф繝鍥у偍妞ゃ儳顎怱PR缂傚倸鍊搁崐鐑芥倿閿斿墽鐭欓柟鐑橆殕閸庡孩銇勯弽顐粶闁绘帒鐏氶妵鍕箳閸℃ぞ澹曟俊鐐€х紓姘跺础閹惰棄绠栫憸鏂跨暦椤愶箑唯闁靛牆妫楁刊浼存⒒娓氣偓閳ь剛鍋涢懟顖涙櫠閺夋垟鏀介柍銉﹀墯閸ょ喖鏌嶈閸撱劎绱為崱娑樼婵ǹ娉涘Ч鏌ユ煃閸濆嫭鍣洪柛濠傜仛缁绘盯骞嬮悙鍨櫑婵犳鍠栭崯鎾蓟濞戙垹绫嶉柟鐐綑椤忥拷

闂傚倸鍊风粈渚€骞夐敓鐘偓鍐幢濡炴洖鎼オ浼村川椤撶偟浜伴梻濠庡亜濞诧妇绮欓幒妤€鍚归柛鏇ㄥ灡閻撶喖鏌熼柇锕€澧婚柛銈囧枛閺屾洟宕奸悢绋垮攭濡ょ姷鍋為悧鐘差嚕閸洖绠i柣妯活問閸炲爼姊绘担鍛婂暈闁荤喆鍎辫灋婵犻潧妫ḿ鏍р攽閻樺疇澹橀幆鐔兼⒑闂堟侗妾х紒鑼帶闇夐柣鎴eГ閻撶喖鏌eΟ澶稿惈闁告柨绉堕幉鎼佸级閸喗娈婚梺璇″枔閸庣敻寮幘缁樻櫢闁跨噦鎷� - 婵犵數濮烽弫鎼佸磿閹寸姴绶ら柦妯侯槺閺嗭附銇勯幒鎴濐仼闁活厽顨婇弻娑㈠焺閸愶紕绱板銈傛櫆閻擄繝寮诲☉銏犵労闁告劖鍎冲В鈧梻浣告贡閸庛倝骞愭ィ鍐︹偓鍛存倻閽樺顔愰柡澶婄墕婢х晫绮旈悽鍛婄厱閹兼番鍨归悘銉╂煃閽樺妯€妤犵偞锕㈤、娑橆潩椤愩埄妫滃┑鐘垫暩閸嬬偤宕归崼鏇炵闁冲搫鍊婚々鍙夌節婵犲倸鏆熼柡鍡畵閺岋綁寮崶顭戜哗缂佺偓鍎抽妶鎼佸蓟濞戙垹鐒洪柛鎰靛幖椤ユ繈姊洪崨濠冣拹閻㈩垽绻濋獮鍐ㄎ旈崨顓熷祶濡炪倖鎸鹃崑妯何i幇鐗堚拺缂備焦岣块埊鏇㈡煟閻旀繂娲ょ粻顖炴倵閿濆骸鏋涚紒鐘崇叀閺岀喐瀵肩€涙ɑ閿梺璇″枙缁舵艾顫忓ú顏勫窛濠电姴鍊婚鍌涚節閳封偓閸曞灚鐤侀悗娈垮枟婵炲﹪骞冮姀銈嗗亗閹艰揪缍嗛崬瑙勪繆閻愵亜鈧牠寮婚妸鈺傚€舵繝闈涚墢閻滅粯绻涢幋娆忕仾闁绘挻鐟╅幃褰掑Ω閵夘喗笑闂佺ǹ锕ら…鐑藉箖閻戣棄顫呴柕鍫濇閸樺崬鈹戦悙鍙夘棡闁挎岸鏌h箛瀣姕闁靛洤瀚伴、鏇㈠閳轰礁澹庨柣搴ゎ潐濞叉粍绻涢埀顒傗偓娈垮枙缁瑩銆侀弽顓ф晝闁挎繂鎳忕拠鐐烘倵濞堝灝鏋熼柟顔煎€垮顐﹀箻缂佹ɑ娅㈤梺璺ㄥ櫐閹凤拷

濠电姷鏁搁崑鐐哄垂閸洖绠伴柟闂寸贰閺佸嫰鏌涢锝囪穿鐟滅増甯掗悙濠冦亜閹哄棗浜鹃弶鈺傜箖缁绘繈鎮介棃娴躲垽鎮楀鐓庢珝闁诡垰鏈幆鏃堝Ω閿旀儳骞橀柣搴ゎ潐濞叉牕煤閵堝棛顩锋繝濠傜墛閻撴洟鏌i幇顒傛憼閻忓骏绠撻弻鐔兼寠婢跺ň鍋撴繝姘劦妞ゆ帒锕︾粔鐢告煕閹炬潙鍝烘い銏℃婵¤埖寰勭€n亙鍖栭梻浣筋潐婢瑰寮插☉娆庣箚闁惧繐婀辩壕濂告煏婵炑冨枤閺嗩參姊洪悷鏉挎Щ闁瑰啿閰i妶顏呭閺夋垹顦ㄩ梺闈浤涢埀顒勫磻閹惧绡€婵﹩鍘鹃崢鎼佹煟鎼搭垳绉甸柛瀣閹便劑宕奸妷锔惧幐閻庡厜鍋撻柍褜鍓熷畷鐗堟償閵娿儳鍘洪梺鍝勫暙閻楀棝宕¢幎鑺ョ厽婵☆垱瀵ч悵顏呮叏閿濆懎顏柡宀嬬稻閹棃濮€閳垛晛顫岄梻浣告啞濮婂湱鏁垾宕囨殾婵犻潧顑嗛崑鍕煟閹惧啿顔傞柕澶嗘櫆閻撱儵鏌i弴鐐测偓鍦偓姘炬嫹

相关新闻
    生物通微信公众号
    微信
    新浪微博
    • 搜索
    • 国际
    • 国内
    • 人物
    • 产业
    • 热点
    • 科普
    • 急聘职位
    • 高薪职位

    知名企业招聘

    今日动态 | 人才市场 | 新技术专栏 | 中国科学人 | 云展台 | BioHot | 云讲堂直播 | 会展中心 | 特价专栏 | 技术快讯 | 免费试用

    版权所有 生物通

    Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

    联系信箱:

    粤ICP备09063491号