你是那10%正确使用Millipore超滤管的达人吗？

　　

超滤是大分子脱盐、浓缩最方便的方法，重复性好，已经在蛋白、抗体、病毒、外泌体、核酸、囊泡等样品制备中建立标准操作。

默克生命科学旗下品牌Millipore的Amicon Ultra超滤管采用离心方式快速处理样品，是很多科研小伙伴们每天要用到的基本装备。但是，在默克生命科学团队推出超滤管中文说明书（0.5、4、15）之前，我们发现近90%的使用者在选择和使用过程中因为缺乏必要信息而没有获得最佳体验，更重要的是，宝贵的样本会遭受本可避免的损失！

• 选对截留分子量，事半功倍

如果目的蛋白是120kDa，请问应该选择的超滤管规格是100k、50k，还是30k甚至10k？你采用1/2、1/3抑或1/6算法？这些没有统一的说法，是因为不同厂家对膜的截留分子量的定义不同。Millipore超滤管采用其特有的再生纤维素膜，定义为：一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少90% 以上的这个大小的球形分子，即100kDa的球形蛋白用100k的Ultracel再生纤维素膜得率超过90%。请仔细查看以下Millipore官方数据：

截留分子量选小啦！看到这个表，你是否发现原来抱怨Millipore超滤管流速偏慢的根源来自对Millipore截留分子量定义的误解？膜孔径要小于目的分子。因为样品分子形状不同，为了最大化样品的回收，对于没有参考的样品，可以初步选择截留分子量约为目的分子分子量1/2的膜。

• 倒转离心，最大化回收率

收取体积已经很小的浓缩好的样品时，你会：

 购买最尖细的枪头，把样品吸回来
 浓缩倍数低一点，以便用枪头把样品吸回来
 反转离心回收，获得最高得率

最后一个，你答对了么？

Millipore Amicon Ultra系列超滤管上样体积有0.5/2/4/15/70mL等五种，除了采用低吸附的管材和最低蛋白吸附的再生纤维素超滤膜，其中0.5mL、2mL和70mL的规格还特别设计了反转回收模式，以便使已经浓缩的样品最大化回收。现在你总该知道为什么收到产品时会有两个外管了吧～

• 脱盐浓缩，一个超滤管搞定

浓缩用超滤管，脱盐用透析袋或脱盐柱，这是很多实验室一直沿用的实验操作。其实呢，超滤管做“脱盐+浓缩”，也是很多蛋白操作高手的小诀窍。Millipore中文官方说明书特别给大家提示了这个方法——用更少的工具和更短的时间，减少转移误操作和样品损失，却能获得更好处理效果，你get了吗？

更多关于超滤管的正确使用问题：

• 蛋白在浓缩时出现了沉淀，如何改进？
• Amicon^® Ultra超滤管可以用酒精消毒灭菌么？
• 怀疑浓缩过程中目的蛋白和超滤膜之间可能存在非特异性吸附，如何改善？
• 有时候用超滤离心管连水都离不下来，可能是什么原因？
• ……

Tips

大体积超滤请选用Amicon搅拌式超滤杯，可以满足1L以内的样品浓缩脱盐。

透析请选用D-tube透析管，温和脱盐换液，标准枪头操作。