从开始到结束：人iPS细胞基因编辑和单细胞克隆系统

人诱导多能干细胞（Human induced pluripotent stem cells，人iPS细胞) 是一个功能强大的研究工具和疾病模型，因为其具备无限增殖、自我更新、分化为多种细胞类型的能力，而且人iPS细胞还可以再现细胞来源个体的疾病表型和基因型。人iPS细胞结合新的CRISPR/Cas9的基因编辑技术，就可以进行疾病模型中遗传变异的功能性研究以及更深远的再生医学研究。

CRISPR/Cas9系统只需一个Cas9核酸酶结合一个单链向导RNA（ single guide RNA，sgRNA)就可以决定其靶向特异性，进行基因编辑 (Jinek et al. 2012)。这两个组件可以通过多种方法成功导入至靶细胞，如载体表达系统，RNA转染系统，或直接导入Cas9/sgRNA核糖核蛋白(ribonucleoprotein，RNP)复合物(Sander and Joung 2014)。与载体表达系统相比，直接导入Cas9/sgRNA RNPs提供了一种快速转入基因编辑实验的方法，同时脱靶效应的可能性更小 (Kim et al. 2014)。Takara旗下的Clontech品牌提供两种Cas9/sgRNA RNPs导入方法，即电穿孔（Electroporation）导入系统或者纳米囊泡（Gesicle）导入系统，帮助您实现高效的、低脱靶效应的基因编辑。

一旦Cas9/sgRNA RNP复合物被导入, 为了分离和筛选感兴趣的基因型，单细胞需要被分离并扩增为克隆细胞系。传统的hiPS 细胞以集落状生长和传代，不利于进行单细胞分离和单细胞培养，为基因编辑后hiPS 细胞建立克隆增加了难度。Takara旗下Cellartis品牌的DEF-CS™ culture system（Asplund et al. 2016）是一个支持无饲养层、基于细胞单层培养的系统，规避了集落状培养带来的挑战，允许单细胞传代和促进接种的单细胞存活和后续扩增，帮助您获得基因编辑后感兴趣的单细胞克隆。

从开始到结束，Takara全套的人iPS细胞基因编辑工具任您选择。

Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一个完整的，在无饲养层和成分确定条件下，用于hiPSCs有效扩增和扩大生产的系统。试剂盒包含了从接种单细胞至96孔板到扩增至48孔板过程中所有必要的试剂。单细胞克隆扩增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。

Cellartis iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System (Code No. 632643) 是一个完整的系统，允许通过电穿孔的方法对hiPSCs进行有效的基因编辑以及随后的单细胞克隆形成和扩增至48孔板。该系统中提供了重组Cas9蛋白质，以及产生大量sgRNAs所有必要的试剂，用于电穿孔hiPSCs。系统中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (前面所述) 组份，用于进行基因编辑后的单细胞克隆形成和扩增。单细胞克隆扩增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。

Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System (Code No. 632642)是一个完整的系统，允许通过gesicle导入Cas9/sgRNA复合物进行有效的基因编辑随后的单细胞克隆形成和扩增至48孔板。Gesicles是一种无毒的、高效的、替代电穿孔的方法，不依赖昂贵的设备或耗材。系统中提供所有的必要试剂用于产生细胞衍生的纳米囊泡（称做gesicles），来转导Cas9和sgRNA至hiPSCs。系统中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit（前面所述）组份，用于进行基因编辑后的单细胞克隆形成和扩增。单细胞克隆扩增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。

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