选对转印膜，Western离成功又进一步[新品推荐]

为了获得一个漂亮的western blot结果，大家也是蛮拼的。一抗、二抗、封闭、显色，各种优化。唯独转印膜，大家好像不太在意。一般都是实验室里有什么，我就用什么。NC、PVDF，照单全收。殊不知，这小小的一块膜也与最终的结果息息相关。如何选择最合适的转印膜，小编来给你支两招。

NC膜 vs. PVDF膜

硝酸纤维素（NC）膜和聚偏二氟乙烯（PVDF）膜是western blot中最常用的两种膜。NC膜是最早用于western blot的膜，它的优点在于容易被乙醇溶液润湿，同时产生不错的结果。PVDF膜在1985年被开发出来，在严苛条件下表现出更高的蛋白保留，比如有机溶剂存在时，或者在酸性或碱性条件下。

与NC膜相比，PVDF膜有着更高的机械强度和出色的化学稳定性，因此适合多次剥离（stripping）和反复检测（reprobing）。同时，PVDF膜也有着更高的结合能力。NC膜的典型结合能力是80 μg/cm2，而PVDF膜达到150-160 μg/cm2，这意味它的灵敏度更高。由于PVDF膜的疏水性，它成为疏水蛋白质（如膜蛋白）的首选。也正因为如此，PVDF膜在使用前需要一个简短的甲醇润湿步骤。

PVDF膜也有讲究

看到这里，也许你准备打电话订购PVDF膜了吧，别急，这里面的学问还不少。同样是PVDF膜，它们的性质也有不同。以Pall生命科学的FluoroTrans家族为例，尽管这些PVDF膜都具有高的蛋白结合能力，但它们有着不同的侧重点。

FluoroTrans PVDF膜是为N端蛋白测序而优化的，具有高的吸附能力，高的蛋白保留能力以及对于化学溶剂的抗性。它的孔径约为0.2 µm。固定在FluoroTrans膜上的蛋白不容易被去除，即使是用强烈的离液盐。此外，它的荧光背景极低，适合荧光免疫检测。

若是开展western blot，FluoroTrans W PVDF膜则是不二之选。它有着极高的灵敏度、出色的分辨率，在所有检测系统中都表现出非常低的背景水平。此外，它用结合能力和保留能力上的一点点牺牲，换取了转移过程中极低的蛋白穿透。这种膜的通用性也很好，对10 kD的小蛋白和> 100 kD的大蛋白都适用。因此，你不需要在实验室里准备0.2 µm和0.45 µm两种孔径的膜，只要这一种0.2 µm的膜就够了。

各种包装

转印膜通常以各种包装形式提供，比如FluoroTrans W PVDF膜，Pall就提供了一大卷的膜和各种预切膜。相比之下，一大卷（26 cm x 3.3 m）当然更经济实惠，用多少切多少，不过要麻烦一点。各种大小的预切膜（7 x 9 cm、10 x 15 cm或20 x 20 cm）则省时省力，只是不太省钱。

使用小贴士

BSA通常作为NC膜的封闭液，但是对于PVDF膜，它的封闭效果并不好。因此，Pall建议，在封闭PVDF膜时选用0.5%的酪蛋白（Casein）。具体操作如下：将酪蛋白加入缓冲液中，然后在加热板上加热至80℃或直到溶解；不要煮沸溶液。在使用前冷却至25-40℃。

另外，不要让膜在检测过程中的任何时间点干透，如果膜部分变干，可以让膜完全干掉，然后用甲醇重新润湿，之后用缓冲液浸泡，继续操作。如果你对PVDF膜或western blot过程还有其他问题，欢迎咨询Pall。（生物通 余亮）

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