2015创新产品：NanoBRET™ 技术

这是实时检测活细胞内蛋白相互作用的全新技术，是对传统BRET方法的大幅改良。它使用NanoLuc® 萤光素酶作为能量供体，经优化的HaloTag® NanoBRET™ 618荧光基团作为能量受体，二者出色的光谱特征为BRET检测提供了卓越的信噪比和灵敏度，并可用于高通量筛选应用。

每到年末，生物通都会奉上一场技术盛宴 – “生命科学十大创新产品”评选，让你不错过每一项创新的产品和技术。2015年年末，经过一个月的网络投票，并参考专家意见，2015生命科学十大创新产品终于诞生了。（延伸阅读：2015生命科学十大创新产品揭晓）

在了解细胞的生物学特性时，蛋白质相互作用研究是不可缺少的一环。在药物开发的过程中，这一信息也至关重要，有助于确认药物靶点。然而，经典方法，如酵母双杂交、免疫共沉淀等技术，都不能提供动态的蛋白相互作用信息，在发表文章时似乎还缺乏一些说服力。因此，共振能量转移这种方法受到人们的青睐。

与大家熟悉的荧光共振能量转移（FRET）技术相比，生物发光共振能量转移（BRET）技术有不少优点，比如无需激发光，背景更低，也避免了光漂白和自发荧光等问题。

目前，人们大多使用海肾萤光素酶（Rluc）作为能量供体，黄色荧光蛋白（YFP）作为能量受体，在这之间实现能量转移。然而，Rluc和YFP的光谱接近，产生了明显的背景。这种高背景增加了检测噪音，也降低了灵敏度和动态范围。

于是，Promega对BRET方法进行大幅改良。它使用NanoLuc® 萤光素酶作为能量供体，而HaloTag® 蛋白标记的NanoBRET™ 618荧光基团作为能量受体，带来了最新的NanoBRET™ 技术。

集两大专利于一身的NanoBRET™，可不是闹着玩的。NanoLuc® 萤光素酶的分子量仅为19 kDa（171个氨基酸），更适合于构建融合蛋白。别看它小，它的光信号比海肾萤光素酶高两个数量级，因此极少量也能准确定量，特别适合细胞水平蛋白相互作用的研究。

至于能量受体，Promega利用HaloTag® 蛋白标签技术来构建。在评估了一系列荧光基团之后，他们选择了NanoBRET™ 618配基。它与NanoLuc® 的波长配对更加，使得检测数据更加出众。于是，来自NanoLuc® 供体的明亮的蓝移发光信号耦合到远红移的HaloTag® 受体上后，光谱叠加更佳、信号更强、且与传统的BRET分析相比背景更低。

利用这一技术，Promega的科学家开发出一种新方法，能实时测定活细胞内药物与蛋白靶点的结合，这对了解药理作用很关键。同时，NanoBRET技术还有助于测定药物的靶点停留时间，帮助研究人员优化药物，以便增强作用。这项成果于今年1月发表在《Nature Communications》期刊上。（延伸阅读：新方法直接测定药物的靶点停留时间）

请点击此处向Promega索取NanoBRET技术的更多资料