2014创新产品：CRISPR切口酶降低脱靶效应

过去6年，生物通一直在追踪生命科学领域最前沿的创新产品，将其介绍给大家。2014年，生物通继续搜罗新上市的产品，为大家奉上一场技术盛宴。经过一个半月的网页和微信投票以及专家评鉴，2014生命科学十大创新产品终于出炉。

在2014年，CRISPR基因组编辑技术无疑是一颗闪亮的明星。文章的接连发表，显示出CRISPR技术在科学研究和疾病治疗中的巨大潜力。然而，这种技术也并非完美，多项研究表明，CRISPR/Cas9系统可能存在脱靶效应。为了克服这一点，Sigma-Aldrich公司推出了改造的产品 – CRISPR配对切口酶。

Cas9-D10A切口酶配合一对gRNA使用，可以减少意外的脱靶基因修饰。它分别在相对的两条DNA链上产生切口，从而形成功能性的双链断裂。这种设计能最大限度降低脱靶效应，同时保持高效而又特异的基因修饰。为此，CRISPR配对切口酶被生物通读者评为2014年度的创新产品。

此前，Broad研究院的张锋博士曾在《Cell》杂志上发表文章，证实Cas9切口酶突变体的使用能降低CRISPR/Cas9系统的脱靶效应1。在那项研究中，通过配对切口，基因组编辑的脱靶效应被降低50-1500倍。作者认为，这种策略可应用于需要高特异性的基因组编辑研究。

如今，Sigma-Aldrich公司CRISPR配对切口酶的上市，让研究人员也能享用到这一成果。大家可能比较关心，如何设计和订购这一产品。Sigma-Aldrich目前提供预制的CRISPR/Cas9产品，覆盖人、大鼠、小鼠的编码基因。大家可联系客服或在网上进行选择和订购。网址如下：https://crispr.sigmainformatics.com/CrisprSearch.php。当然，大家也可以定制自己的CRISPR/Cas9产品。

在基因组编辑领域，Sigma-Aldrich一直敢为人先。多年前，它就率先推出了基因组编辑工具锌指核酸酶（ZFN）。CRISPR/Cas9是Sigma-Aldrich公司推出的新一代基因组编辑工具。随着技术的发展和应用，Sigma不断更新和完善CRISPR产品，以满足广大客户的需求。

• Cas9/gRNA单质粒系统

Cas9和gRNA构建在单个载体上，提高转染效率；此外，GFP与Cas9共表达，可实现对阳性细胞的富集；优化配置的启动子则可大大提高gRNA和Cas9在细胞内的表达效率。

• Cas9-D10A双切口酶系统

改造的Cas9-D10A配合使用一对gRNA，利用双切口酶活性增强识别特异性，最大限度地降低脱靶效应。

• 高度纯化的RNA系统

纯化的gRNA和Cas9 mRNA直接用于胚胎显微注射，可避免启动子不兼容性和质粒随机整合的风险，尤其适用于胚胎注射以及对dsDNA敏感、存在启动子细胞不兼容的细胞。

除此之外，Sigma还可提供适合各类CRISPR产品的阳性和阴性对照，以及详细的技术介绍和应用说明，保证您的工作更简化、更高效。

我想了解Sigma-Aldrich的CRISPR/Cas9产品

参考文献

1. F. Ann Ran, Patrick D. Hsu, Chie-Yu Lin, Jonathan S. Gootenberg, Silvana Konermann, et al. Double Nicking by RNA-Guided CRISPR Cas9 for Enhanced Genome Editing Specificity. Cell, Volume 155, Issue 2, 10 October 2013, Pages 479-480