CRISPR新品巡礼：Sigma-Aldrich[新品推荐]

在基因组编辑方面，Sigma-Aldrich向来是个先锋。早在近十年前，它就推出了基因组编辑工具锌指核酸酶（ZFN），而在去年8月，它又率先推出了CRISPR/Cas研究工具——Sigma CRISPRs。因此论这一方面的经验，没人比Sigma-Aldrich更丰富。而这种经验在设计基因组编辑工具时尤为重要。Sigma CRISPRs上线一年来，产品线也在不断丰富，下面就让我们来看看具体有哪些产品。

All-in-one的表达质粒

这个All-in-one的载体能同时表达Cas9蛋白和gRNA，而不需要使用两个载体分别表达。在这个载体上，人U6启动子驱动gRNA表达，而CMV启动子被用于表达Cas9和荧光蛋白（GFP或RFP）。他们之所以选择人U6启动子，是因为它优于H1启动子，确保了gRNA的表达效率。GFP或RFP通过2A肽段与Cas9的C端融合，实现了转染效率的追踪，也能通过FACS富集目标细胞群。

对于人类、小鼠和大鼠基因组的编码区，Sigma提供预设计的CRISPR载体，可最大限度降低脱靶效应。对于其他的区域或物种，Sigma也提供定制设计服务，具体请咨询。

高保真的CRISPR切口酶

今年5月，Sigma还推出了CRISPR配对切口酶（nickase）。这种高保真的CRISPR技术经过设计，可减少意外的脱靶基因修饰。传统的CRISPR会导致DNA双链断裂，但它们也容易产生脱靶的基因修饰。与此相反，一对高保真的CRISPR切口酶分别在相对的两条DNA链上产生切口，从而形成双链断裂。这种设计能明显减少脱靶的可能性，同时保持高效而又特异的基因修饰。对于干细胞研究和基因治疗等比较关心脱靶效应的应用，CRISPR切口酶可能更加理想。

在订购CRISPR切口酶时，我们会得到两个立即可转染的质粒，这些质粒表达gRNA，但必须注意，它们不同于上面的all-in-one载体，不表达核酸酶。Cas9-D10A切口酶必须单独订购。Sigma也同样提供预设计和定制设计的质粒。

纯的gRNA以及阳性和阴性对照

此外，Sigma还以纯RNA的形式提供即用的gRNA，适用于显微注射或细胞培养。对于那些想建立转基因动物模型或担心质粒整合的研究人员而言，这种CRISPR RNA形式很理想。不过，这只是单独的gRNA，Cas9核酸酶必须单独购买。

阳性对照是在人EMX1基因上验证过的，可提供参照，让研究人员对其基因组编辑实验的效率进行平行的评估。目前Sigma提供即用的EMX1 positive controls for both single gRNAs（传统CRISPR）和CRISPR paired nickases（高保真CRISPR）。

CRISPR通用型阴性对照则是all-in-one的转染级别质粒，表达野生型Cas9核酸酶，以及gRNA序列，不靶定已知的人类、小鼠或大鼠基因。（生物通 余亮）

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